諾博萊德 海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑盒

海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

目錄號：40317

適用于快速提取各種海洋動物組織基因組DNA

v  試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果

儲存事項:

1.結合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.為避免降低活性、方便運輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1ml滅菌水溶解，因為反復凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃保存。

3.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

v產品介紹：

獨te的結合液/蛋白酶K迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質膜上洗脫。

v注意事項：

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫，但應該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。
v操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指din量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

1.切取不多于30mg 的組織材料，放入裝有180μl組織裂解液SL的1.5ml離心管中，渦旋振蕩15 秒。根據提取的組織不同，起始量也稍有不同，腮的細胞量較大，一般建議提取量不超過20mg。如果裂解困難，可先用液氮研磨。

2.加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。將裂解物放置在55℃水浴1-3小時或者直到組織消化完quan。

不同組織裂解時間不同，通常需0.5–2小時即可完成。扇貝組織0.5小時基本可裂解完quan，蝦和魚類組織1小時。每小時振蕩混合樣品2-3次，每次振蕩混勻15 秒。

可選做步驟: 如果RNA殘留較多，需要去除RNA，可在完成步驟2后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。

3.加入200μl 結合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置10分鐘。

4.冷卻后加100μl 異丙醇，充分顛倒或渦旋振蕩充分混勻，此時可能出現絮狀沉淀。

5.將上一步混合物和可能的沉淀都加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液。

  如果有不溶組織物可能堵住槍頭，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去，該做法是為了去除不溶物，以免堵塞離心柱。

  上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要，混勻不充分嚴重降低產量，必要時如樣品粘稠不易混勻時可以渦旋振蕩15秒混勻。

6.  加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。

7. 加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

8.  加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

9.  將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

10.  取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預熱效果更好）， 室溫放置3-5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產量。

11.   DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放，可以放置在－20℃。