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北京諾博萊德科技有限公司
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當前位置:北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學>>質粒提取>> NAE02質粒小量提取試劑盒 -常備現貨

質粒小量提取試劑盒 -常備現貨

參  考  價面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號NAE02

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質生產商

所  在  地北京市

更新時間:2025-03-15 13:59:31瀏覽次數:498次

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供貨周期 現貨 規格 50T/100T
貨號 NAE02 應用領域 化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥,綜合
主要用途 本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA
本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。
質粒小量提取試劑盒 -常備現貨

NobleRyder NAE02 質粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit

 

產品貨號:NAE02

產品名稱:質粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit

英文名稱:Plasmid Extraction Mini Kit

產品規格:50T/100T

質粒小量提取試劑盒 -常備現貨

產品簡介:

儲存條件:酶附件-20℃,其它試劑RT,有效期1年。

 

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞,根據離心吸附柱在高鹽狀態下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作,包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。

使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入體積請參照瓶體上的標簽。溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入),混勻,置于 2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

操作步驟(僅供參考):

1. 取 1-5mL 細菌培養物,12000rpm 離心 1min,盡量吸除上清(菌液較多時可以通過多次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中)。

2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入250μL溶液Ⅰ(請先檢查是否已加入RNase A),使用移液器或旋渦振蕩器che底懸浮細菌細胞沉淀。注意:如果菌塊未che底混勻,會影響裂解導致質粒提取量和純度偏低。

3. 向離心管中加入250μL溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細菌基因組 DNA,此時菌液應變得清亮粘稠,作用時間不要超過 5min,以免質粒受到破壞。

4. 向離心管中加入350μL溶液Ⅲ,立即溫和地上下翻轉6-8次,充分混勻,此時會出現白色絮狀沉淀,12000rpm離心10min,用移液器小心地將上清轉移到另一個干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液Ⅲ加入后應立即混合,避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

5. 取上一步上清,加入0.4倍體積無水乙醇,充分混勻。(體積過多可分兩次混合,然后上柱)。

6. 將上一步混合液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中(如果為了提高得率,可將收集管中的液體加入吸附柱再次吸附一次)。

7. 向吸附柱中加入750μL漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入700μL漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

9. 12000rpm 離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗,如酶切、PCR等。

10. 將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200μL經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。

11. 為了增加質粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置 2min,12000rpm 離心1min。

質粒小量提取試劑盒 -常備現貨 

注意事項:

1. 使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁,如有混濁現象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、漂洗液使用后應立即擰緊蓋子。

2. 洗脫緩沖液體積不應少于50μL,體積過小影響回收效率;洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍),pH 值低于7.0會降低洗脫效率,DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。

3. 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒,應加大菌體使用量,使用5-10mL過夜培養物,同時按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時可以適當的延長時間,以增加提取效率。

4. DNA 濃度及純度檢測:得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。得到的 DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA 應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50ug/mL雙鏈DNA、40ug/mL單鏈DNA。OD260/OD280比值應為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響吸光值,但并不表示純度低。

 

產品訂購信息:

NAE02  質粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit  50T

NAE02  質粒小量提取試劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit  100T

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