諾博萊德 細胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒

NobleRyder P4939 細胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒

產品貨號：P4939

產品名稱：細胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒

產品規格：50T/100T

細胞膜胞漿核膜蛋白分步提取試劑盒

產品簡介：

中文名稱：細胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒

規格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

細胞膜蛋白/胞漿蛋白/核膜蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織中分步提取細胞膜蛋白/胞漿蛋白/細胞核膜蛋白/核內蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

適用樣本：動物細胞

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品簡介：

細胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織中分步提取細胞膜蛋白/胞漿蛋白/細胞核膜蛋白/核內蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1、使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2、將蛋白提取的時間縮短至 1 小時。

3、含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4、紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

二、操作步驟

1. 提取液準備：

每 400ul 冷的蛋白提取液 A/B/D 中都分別加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物和 2ul 磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2．取 5-10×10⁶個細胞，在 4℃，800×g 條件下離心 5-10 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干。

3. 用冷 PBS 洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 每 5×10⁶個細胞中加入 400ul 冷的蛋白提取液 A，混勻后，在 4℃條件下用試劑盒所配針筒反復吸吹細胞，使細胞wan全破裂。

5. 在 4℃，1000×g 條件下離心 5 分鐘。

6. 將上清(I)吸入另一干凈離心管，在沉淀中加入 100-200μl 冷的提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒，充分混勻。

7. 將混勻的提取液 B 置 4℃低速振蕩 30-60 分鐘。

8. 將提取液 B 在 37℃條件下水浴 10 分鐘。

9. 將提取液 B 在 37℃下 1000-2000×g 離心 5 分鐘，此時溶液分為兩層（對著光線看），上層為核內蛋白，下層是核膜蛋白約為 20-40μl。小心移除上層，用 1-2 倍體積的冰冷的提取液 D 溶解下層即為細胞核膜蛋白。

10. 在步驟 6 中所得到的上清(I)中加入 5μl 提取液 C，充分混勻。

11. 在 2-8℃振蕩 20-30 分鐘。

12. 在 37℃水浴 10 分鐘。

13. 在 37℃下，1000×g 離心 3 分鐘，此時溶液分為兩層，上層是胞漿蛋白部分，下層部分（II）是細胞膜蛋白約為 40-50μl。

14. 將上層小心吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白。

15. 用 50-150μl 冰冷的提取液 D 溶解步驟 13 中的下層部分（II），即得細胞膜蛋白。

16. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低？

處理部分樣本時可能沒有裂解wan全，導致核蛋白/膜蛋白濃度低。只要適當延長試劑 BC 的處理

時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大細胞的上樣量。

2. 用什么方法定量蛋白？

建議用 BCA 法。不適合用 Bradford 法，因為試劑 A 中含有干擾 Bradford 法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用 Bradford 法定量。

3. 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗

細胞膜胞漿核膜蛋白分步提取試劑盒

產品訂購信息：

P4939  細胞膜/胞漿/核膜蛋白分步提取試劑盒  50T/100T