Thermo Scientific組織線粒體分離試劑盒§為從軟及硬組織中分離完整線粒體提供了新的工具。該試劑盒提供兩種分離線粒體的方法。種方法使用的基于試劑的方法，可以同時(shí)處理多個(gè)樣品。第二種方法依賴于傳統(tǒng)的杜恩斯勻漿及下游分離細(xì)胞器的方法。兩種方法均使用臺(tái)式微量離心機(jī)進(jìn)行差速離心來(lái)分離完整線粒體，整個(gè)過(guò)程在60分鐘以內(nèi)即可完成。而且，兩種方法均經(jīng)過(guò)優(yōu)化，在獲得量的線粒體的同時(shí)將對(duì)其完整性的影響降至最小。分離得到的線粒體可用于1D和2D電泳、蛋白免疫印跡以及利用質(zhì)譜進(jìn)行蛋白測(cè)定等下游應(yīng)用。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
- 方便快捷–在60分鐘內(nèi)即可分離完整線粒體。
- 通用–提供兩種從軟及硬組織中分離完整線粒體的方法。
- 多樣品模式–基于試劑的方法可以同時(shí)處理多個(gè)樣品。
- 方案可選–試劑盒包括可用于傳統(tǒng)杜恩斯勻漿的試劑和方法，需要的勻漿次數(shù)更少。
- 兼容臺(tái)式微量離心機(jī)–兩種方法均可在微量離心管中完成。
線粒體完整性分析。分別使用基于試劑的方法(A和B)和杜恩斯勻漿法（C和D）從大鼠肝臟（圖1，2，3，5及6）和心臟（圖4）中制備線粒體(M)和胞漿(C)組分。利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析各組份中COX4、電壓依賴性離子通道(VDAC)以及。使用的底物為用于蛋白免疫印跡的SuperSignal皮克級(jí)化學(xué)發(fā)光底物(產(chǎn)品貨號(hào) 34080)。COX4是線粒體內(nèi)膜蛋白，VDAC是線粒體外膜蛋白，位于線粒體膜間質(zhì)內(nèi)。
利用2D蛋白免疫印跡對(duì)分離的線粒體中的超氧化物歧化酶(Mn-SOD)進(jìn)行分析。利用杜恩斯勻漿法從雌性SD（Sprague-Dawley）大鼠的肝臟中分離完整的線粒體。利用Thermo Scientific M-PER哺乳動(dòng)物細(xì)胞總蛋白抽提試劑(產(chǎn)品貨號(hào)78501)裂解分離得到的線粒體將大約35μg的線粒體總蛋白加入到2D上樣緩沖液(8M尿素,4% CHAPS, pH 5-8 載體兩性電解質(zhì), 50 mM DTT)中。先用pH 5-8 IPG膠條對(duì)蛋白進(jìn)行電泳，然后用8-16%SDS-PAGE進(jìn)行第二維電泳，最后利用蛋白質(zhì)免疫印跡分析Mn-SOD。
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