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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
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賽默飛ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀技術(shù)介紹
一、設(shè)備概述
ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是Thermo Fisher Scientific旗下Applied Biosystems系列的一款用于核酸定量分析的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。該系統(tǒng)集成了高精度溫控模塊、熒光檢測(cè)光學(xué)系統(tǒng)與分析軟件，可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的DNA、RNA擴(kuò)增與定量分析，適用于科研、臨床輔助檢測(cè)及教學(xué)實(shí)驗(yàn)等場(chǎng)景。
本儀器采用基于TaqMan探針和SYBR Green等熒光染料的實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)，在反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化，以推算擴(kuò)增產(chǎn)物的起始拷貝數(shù)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的絕對(duì)或相對(duì)定量。
二、主要技術(shù)參數(shù)
反應(yīng)孔數(shù)與反應(yīng)體系
配備標(biāo)準(zhǔn)96孔反應(yīng)模塊，適配標(biāo)準(zhǔn)0.2 mL PCR管或板；
反應(yīng)體系體積范圍：10–100 μL。
溫控系統(tǒng)
采用Peltier元件控溫，升降溫速率可達(dá)1.6°C/s；
溫控精度：±0.25°C；
均一性（Uniformity）：<0.5°C（在90分鐘PCR程序末端）；
設(shè)定溫度范圍：4°C至100°C；
熱蓋功能可調(diào)，防止樣品蒸發(fā)。
光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)
配備高強(qiáng)度氙燈（Xenon Lamp）作為激發(fā)光源；
五通道檢測(cè)，支持多重?zé)晒鈽?biāo)記（FAM、VIC、ROX、SYBR、TAMRA等）；
熒光檢測(cè)采用多通道濾光片系統(tǒng)，實(shí)時(shí)采集反應(yīng)曲線；
數(shù)據(jù)采集精度高，可實(shí)現(xiàn)單拷貝檢測(cè)。
軟件系統(tǒng)
使用SDS軟件（System Detection Software）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)置與結(jié)果分析；
支持Ct值分析、標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建、絕對(duì)/相對(duì)定量分析、基因表達(dá)分析、SNP分型、熔解曲線分析等功能；
數(shù)據(jù)格式兼容性好，可導(dǎo)出為Excel、CSV等格式，便于進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析；
支持圖形可視化、模板管理和自動(dòng)報(bào)告生成。
三、系統(tǒng)組成與工作原理
組成結(jié)構(gòu)
主機(jī)：包含溫控模塊、熒光激發(fā)與檢測(cè)系統(tǒng)、自動(dòng)熱蓋；
控制終端：PC端軟件連接主機(jī)進(jìn)行控制與數(shù)據(jù)分析；
電源與通信接口：支持USB連接和LAN網(wǎng)絡(luò)；
軟件套件：含標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)?zāi)０濉?shù)據(jù)管理模塊、統(tǒng)計(jì)分析工具。
工作流程
準(zhǔn)備反應(yīng)體系（包括引物、探針、模板、反應(yīng)緩沖液）；
裝載PCR反應(yīng)板至儀器；
設(shè)置PCR程序及熒光采集參數(shù)；
系統(tǒng)按預(yù)設(shè)程序升溫、擴(kuò)增并采集熒光信號(hào)；
通過軟件進(jìn)行結(jié)果分析，如Ct值計(jì)算、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制等。
檢測(cè)機(jī)制
熒光信號(hào)由特定波長(zhǎng)激發(fā)并由對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)濾光片檢測(cè)；
每個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)采集熒光強(qiáng)度，生成擴(kuò)增曲線；
熒光信號(hào)與擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量成正比；
使用參考染料（如ROX）進(jìn)行信號(hào)校正，確保結(jié)果穩(wěn)定。
四、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用舉例
基因表達(dá)定量分析
常用于mRNA水平的相對(duì)表達(dá)分析；
通過ΔΔCt法評(píng)估處理組與對(duì)照組間的表達(dá)變化；
可用于細(xì)胞應(yīng)答研究、基因功能驗(yàn)證、藥物作用機(jī)制研究。
基因分型與突變檢測(cè)
利用SNP探針進(jìn)行個(gè)體基因型判別；
可識(shí)別單堿基突變、插入缺失等小范圍變異；
適用于遺傳疾病研究與個(gè)體化醫(yī)學(xué)篩查。
病毒載量檢測(cè)
對(duì)病毒RNA/DNA進(jìn)行絕對(duì)定量，評(píng)估感染程度；
應(yīng)用于HIV、HBV、SARS-CoV-2等臨床監(jiān)測(cè)；
支持通過外標(biāo)曲線精確測(cè)算目標(biāo)序列拷貝數(shù)。
轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)
檢測(cè)GMO農(nóng)產(chǎn)品中外源基因存在與含量；
可用于農(nóng)業(yè)監(jiān)管、食品安全與貿(mào)易合規(guī)。
微生物檢測(cè)與菌群分析
快速檢測(cè)特定微生物；
可進(jìn)行定性篩查或定量評(píng)價(jià)；
支持16S rRNA等目標(biāo)序列分析。
五、設(shè)備操作要點(diǎn)與維護(hù)建議
操作規(guī)范
嚴(yán)格控制反應(yīng)體積、試劑濃度及移液準(zhǔn)確性；
每次實(shí)驗(yàn)前需校準(zhǔn)熱蓋與熒光檢測(cè)系統(tǒng)；
保持儀器通風(fēng)良好、無灰塵污染。
維護(hù)要點(diǎn)
定期更換光源燈泡并校準(zhǔn)光路；
檢查并清潔濾光片及熱蓋；
軟件需定期更新，避免兼容性問題；
長(zhǎng)期不使用時(shí)建議拔除電源，并進(jìn)行防潮處理。
六、技術(shù)優(yōu)勢(shì)與注意事項(xiàng)
優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)
操作流程標(biāo)準(zhǔn)化，適合多用戶共享平臺(tái)；
軟件界面清晰，易于設(shè)置與分析；
檢測(cè)靈敏度高，適合低拷貝序列定量；
支持多重?zé)晒鈾z測(cè)，節(jié)省時(shí)間與樣本量。
常見問題及規(guī)避
空白孔熒光異常：檢查污染或反應(yīng)體系配置錯(cuò)誤；
熔解曲線異常：排查引物二聚體、污染擴(kuò)增等；
弱陽(yáng)性/擴(kuò)增失敗：優(yōu)化引物、退火溫度或酶系統(tǒng)。
七、總結(jié)與適用性評(píng)估
ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)憑借其穩(wěn)定的控溫性能、靈敏的熒光檢測(cè)能力及功能完善的軟件平臺(tái)，在多種分子生物實(shí)驗(yàn)中具有廣泛適用性。其標(biāo)準(zhǔn)化配置與模塊化功能可滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)數(shù)據(jù)可重復(fù)性與檢測(cè)精度的要求。作為一款成熟的實(shí)時(shí)定量PCR平臺(tái)，該設(shè)備尤其適合需要中等通量、標(biāo)準(zhǔn)分析功能的科研單位、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和高校教學(xué)實(shí)驗(yàn)室。
