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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
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賽默飛超微量分光光度計(jì)（如NanoDrop系列）是一種常用于測(cè)量DNA、RNA、蛋白質(zhì)濃度的實(shí)驗(yàn)室儀器。其操作簡(jiǎn)單、測(cè)量快速、樣品消耗極少，因此廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。以下是詳細(xì)的使用方法，包括準(zhǔn)備、操作步驟和注意事項(xiàng)。
一、準(zhǔn)備工作
設(shè)備檢查：
確保分光光度計(jì)連接電源并打開(kāi)設(shè)備。
檢查設(shè)備是否已正確連接到計(jì)算機(jī)，軟件是否安裝并可正常運(yùn)行（如NanoDrop軟件）。
樣品準(zhǔn)備：
確保樣品充分混勻并適當(dāng)稀釋?zhuān)ㄈ绻麧舛冗^(guò)高可能影響讀數(shù)）。
樣品通常為DNA、RNA、蛋白質(zhì)或其他生物分子溶液。
清潔檢測(cè)平臺(tái)：
使用無(wú)絨擦拭紙輕輕擦拭測(cè)量平臺(tái)（光纖）和上臂，確保無(wú)灰塵和殘留物，避免影響測(cè)量結(jié)果。
選擇適合的模式：
根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)的測(cè)量模式，如核酸（DNA、RNA）模式、蛋白質(zhì)模式、或其他特殊分析模式。
二、操作步驟
1. 打開(kāi)NanoDrop軟件
在計(jì)算機(jī)上打開(kāi)NanoDrop軟件，選擇需要的測(cè)量模式（如核酸、蛋白質(zhì)、A280等）。不同模式根據(jù)測(cè)量目標(biāo)的不同會(huì)有所變化。
2. 校準(zhǔn)設(shè)備（Blank）
每次測(cè)量前，使用空白樣品進(jìn)行校準(zhǔn)。空白樣品一般為純水或與樣品相同的緩沖液，校準(zhǔn)步驟如下：
將1-2微升的空白液體滴在光纖平臺(tái)上。
放下上臂，確保液體被夾在上臂和測(cè)量平臺(tái)之間。
點(diǎn)擊軟件中的“Blank"按鈕，設(shè)備將進(jìn)行校準(zhǔn)以消除背景吸光度。
3. 加入樣品
校準(zhǔn)完成后，按照以下步驟進(jìn)行樣品測(cè)量：
用移液器取1-2微升樣品，準(zhǔn)確滴加到光纖平臺(tái)的中心位置。
輕輕放下上臂，使樣品處于光纖間的檢測(cè)區(qū)域。
在軟件中點(diǎn)擊“Measure"按鈕，開(kāi)始樣品的測(cè)量過(guò)程。
4. 讀取結(jié)果
測(cè)量結(jié)果會(huì)立即顯示在軟件界面上，包括吸光度（A260、A280）和核酸或蛋白質(zhì)的濃度值。
如果是核酸測(cè)量，通常會(huì)提供A260/A280和A260/A230的比值，用于評(píng)估樣品的純度。
5. 清潔平臺(tái)
每次測(cè)量完成后，都應(yīng)使用無(wú)絨擦拭紙輕輕擦拭光纖平臺(tái)和上臂，確保樣品殘留被清除，避免交叉污染。
三、數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出
NanoDrop軟件通常提供了數(shù)據(jù)保存和導(dǎo)出功能。在測(cè)量完成后，用戶可以選擇保存數(shù)據(jù)到電腦中，或?qū)С鰹镋xcel或其他格式的文件，便于后續(xù)分析和記錄。
四、注意事項(xiàng)
樣品體積：
超微量分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)允許使用極少量的樣品，通常只需1-2微升。如果樣品體積過(guò)少，可能導(dǎo)致檢測(cè)不準(zhǔn)確或無(wú)法進(jìn)行測(cè)量。樣品純度：
核酸的A260/A280比值應(yīng)在1.8-2.0之間，如果比值偏離這個(gè)范圍，可能表示蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)的污染。定期校準(zhǔn)：
建議定期使用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保設(shè)備的測(cè)量精度。設(shè)備維護(hù)：
長(zhǎng)期使用后，應(yīng)定期對(duì)光纖平臺(tái)進(jìn)行清潔，防止樣品殘留物影響讀數(shù)。遵循廠家提供的維護(hù)指南可以延長(zhǎng)設(shè)備使用壽命。樣品稀釋：
高濃度樣品可能超出儀器的線性檢測(cè)范圍，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。必要時(shí)，建議先稀釋樣品再進(jìn)行測(cè)量。
五、常見(jiàn)問(wèn)題與解決
讀數(shù)異常：
樣品可能含有氣泡或未充分混勻。
平臺(tái)上殘留有之前的樣品。
樣品濃度過(guò)高，需稀釋后再測(cè)。
低純度比值（A260/A280或A260/A230）：
樣品中可能含有蛋白質(zhì)、酚類(lèi)或其他污染物。需進(jìn)一步純化樣品。
使用錯(cuò)誤的空白液體進(jìn)行校準(zhǔn)，需確?？瞻滓后w與樣品溶劑一致。
平臺(tái)殘留液體：
每次測(cè)量后應(yīng)立即清潔平臺(tái)，避免樣品干燥在平臺(tái)上。
如果有殘留難以清除，可以使用70%乙醇或去離子水濕潤(rùn)擦拭紙進(jìn)行清潔。
六、總結(jié)
賽默飛超微量分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行生物分子濃度測(cè)定的強(qiáng)大工具，使用簡(jiǎn)單、快速且節(jié)省樣品。在日常操作中，注意樣品的準(zhǔn)備、平臺(tái)清潔和設(shè)備校準(zhǔn)，可以確保獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
