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用電熱恒溫培養箱做小鼠大腦皮層神經元原代細胞培養

閱讀:1055        發布時間:2022/3/25
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  電熱恒溫培養箱常用于各種細菌細胞培養實驗,那小鼠大腦皮層神經元原代細胞是如何培養的的呢?由小喆帶大家了解一下。

  小鼠大腦皮層神經元原代培養步驟:
  1、于無菌條件下切取鼠頭并以75%酒精浸泡1min,解剖出完整鼠腦;
  2、預冷解剖液中分離去除軟膜、血管、取大腦皮質漂洗,用眼科剪將皮質反復剪切成碎塊;
  3、移入培養皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1,電熱恒溫培養箱中37℃消化30min;
  4、將皮層組織碎塊移入離心管,棄去剩余消化液,用接種液洗3次,每次洗滌后使組織塊充分沉降到試管底,棄去上清液;
  5、最后再用接種液1ml混懸,反復吹打(巴氏吸管)混懸液中組織塊,力度適中,至渾濁后將上清液移入培養瓶待用;
  6、加入1ml接種液后再次吹打,如此反復3-4次,組織塊逐漸消化后,棄去最終殘塊;
  7、收集含單細胞懸液的上清液約4-5ml于培養瓶中,以接種液重新懸浮細胞,細胞記數;接種1x107個細胞于6孔培養板中;
  8、培養24h至細胞貼壁后,換全培養液(DMEM/F12+2%B27,engreen)培養3d,觀察神經元生長狀況;
  9、換用阿糖胞苷培養液(終濃度2.5ug/ml,換半液)培養3d以抑制神經膠質細胞及雜細胞生長,獲得單純培養的原代神經細胞;
  10、每隔3d換全培養液1次,每次換半液。

     以上是小喆簡單的見解,關注上海喆圖公眾號,了解更多小知識


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