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生化培養(yǎng)箱對(duì)雞胚背根神經(jīng)節(jié)組織塊的培養(yǎng)
主要用于神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)等神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的生物活性測(cè)定。在差倒置顯微鏡下觀察以神經(jīng)突起的生長(zhǎng)長(zhǎng)度和密度為指標(biāo)半定量評(píng)估NGF的活性。
1、材料和方法
(1)選正常受精的雞蛋，置于37℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)孵化，每日翻動(dòng)雞蛋一次。
(2)取孵化8-12 d 的雞蛋, 用70% 酒精消毒蛋殼，從氣室端敲開(kāi)蛋殼，用消毒鑷剝除氣室部蛋殼。
(3)用彎鑷鉤住雞胚頸部，無(wú)菌條件下取出雞胚置小平皿內(nèi)，除去頭部后，腹側(cè)向上置滅菌毛玻璃片上,用眼科彎鑷子打開(kāi)胸腹腔，除去內(nèi)臟器官。
(4)在解剖顯微鏡下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其兩側(cè)，在椎間孔旁可見(jiàn)到沿脊柱兩側(cè)排列的背根節(jié)(圖1)，用一對(duì)5號(hào)微解剖鑷小心取出。
(5)置背根節(jié)于解剖溶液內(nèi)，用微解剖鑷去除附帶組織，接種于涂有鼠尾膠的玻璃或塑料培養(yǎng)瓶中，在DMEM 無(wú)血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)。
2、結(jié)果
雞胚背根神經(jīng)節(jié)在含神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的無(wú)血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h,神經(jīng)節(jié)長(zhǎng)出密集的神經(jīng)突起。而未加NGF的神經(jīng)節(jié)培養(yǎng)24 h, 未見(jiàn)神經(jīng)突起生長(zhǎng)。