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細(xì)胞增殖-毒性檢測實(shí)驗(yàn)步驟
CCK8試劑盒，是用于測定細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測等。下面培養(yǎng)箱&試劑盒為例，簡要說明細(xì)胞增殖-毒性檢測的操作步驟
方法/步驟
- 在96孔板中配制100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在電熱恒溫培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (在 37℃，5% CO2 的條件下)。
- 向培養(yǎng)板加入 10μl 不同濃度的待測物質(zhì)。
- 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 (例如: 6,12, 24 或 48 小時(shí))。
- 向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù))。
5. 將培養(yǎng)板在電熱恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
- 用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。
- 如果暫時(shí)不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μl 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。