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流式細(xì)胞術(shù)操作步驟指南

閱讀:991      發(fā)布時(shí)間:2024-7-1
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流式細(xì)胞術(shù)具體步驟

1、首先,制備單細(xì)胞懸液


將待測(cè)細(xì)胞或微粒制成單細(xì)胞懸液,經(jīng)特異性熒光染料標(biāo)記抗體進(jìn)行染色,在恒定氣體的壓力下進(jìn)入流動(dòng)室,不含細(xì)胞或

微粒的緩沖液在高壓下從鞘液管?chē)姵觯室汗苋肟诜较蚺c待測(cè)樣品流形成一定角度,鞘液包繞著樣品高速流動(dòng),

組成一個(gè)圓柱形的液流束,待測(cè)細(xì)胞或微粒在鞘液的包被下單行排列,依次通過(guò)檢測(cè)區(qū)域。


2、其次,收集單細(xì)胞上的熒光信號(hào)


流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源,經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上,細(xì)胞或微粒上的熒光染料被激發(fā),

產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)行檢測(cè),這種信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大小;熒光信號(hào)的接受方向

與激光束垂直,經(jīng)過(guò)一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。


3、再次,統(tǒng)計(jì)結(jié)果


熒光信號(hào)的強(qiáng)度代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原強(qiáng)度或細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的濃度,經(jīng)光電轉(zhuǎn)換變?yōu)榭杀挥?jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào)。

計(jì)算機(jī)把所測(cè)量到的各種信號(hào)進(jìn)行計(jì)算機(jī)處理,將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)上。


4、最后,做細(xì)胞分選


細(xì)胞的分選是指根據(jù)所測(cè)定的各個(gè)參數(shù)將的細(xì)胞從細(xì)胞群體中分離出來(lái)的一種方式,通過(guò)分離含有單細(xì)胞的液滴實(shí)現(xiàn)

。在流動(dòng)室的噴口上方配有一個(gè)超高頻的壓電晶體,產(chǎn)生的振動(dòng)使噴出的液流形成均勻的液滴,待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴

之中。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷,當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時(shí),在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn),落入各自的收集

容器中,不予充電的液滴落入中間的廢液容器,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。


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