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熒光定量PCR簡介及原理

閱讀:665      發(fā)布時間:2024-3-18
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熒光定量PCR簡介


熒光定量PCR檢測技術(shù)誕生至今已10多年的時間,而其應(yīng)用一直都沒廣泛展開,究其原因,無外乎受制于相關(guān)儀器、試劑和技術(shù)的發(fā)展

。近期,尤其是08年以來,儀器和試劑是遍地開花,這也使科研人員均躍躍欲試,都想借此技術(shù)使自己的研究能突飛猛進(jìn),

發(fā)展勢頭通過查找每年所發(fā)表的文章數(shù)可一目了然。據(jù)有關(guān)統(tǒng)計,在 Medline 數(shù)據(jù)庫中,用“Taqman" 或 "real time PCR"

作為關(guān)鍵詞檢索,1996 年是19 篇,1999 年157 篇,到2003 年就高達(dá)2984 篇,2009年會是多少呢?我們不得而知

但其迅猛的發(fā)展勢頭卻是不可更改的,本公司真誠希望能和眾多研究人員共同努力,抓住這一大好時機(jī),為科研事業(yè)的發(fā)展貢獻(xiàn)自身的

力量。基于這一目標(biāo),本公司長期以來對熒光定量PCR,無論是技術(shù)還是多年來的產(chǎn)品,均進(jìn)行了深入地研究,

并及時推出更加優(yōu)異的熒光定量 PCR技術(shù)服務(wù)。


熒光定量PCR原理


熒光定量PCR最早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量

技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,

PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化

監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。

13.png

一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,

擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,

PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)最終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。

只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。

為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值


上海雅吉生物是一家生物企業(yè)主營ATCC細(xì)胞,細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒


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