化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
細胞鋪板：如何鋪的均勻
閱讀：4857 發(fā)布時間：2015-5-27做細胞生物學實驗，細胞鋪板大概是zui常見的一個實驗了。但是有很多人不是很得要領，鋪得不是均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。現(xiàn)分享我的實驗技巧。
一般 96 孔板我每孔是加 100 微升細胞懸液，從孔的左邊靠近底部加入。加完半邊板后，將未加的細胞懸液混一下，再繼續(xù)加剩余的半邊板子。都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣。
注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強或次數(shù)太多會導致細胞集中成堆，將板順時針旋轉(zhuǎn)（逆時針效果不好），依次敲擊剩余三個邊，靜置約 5 分鐘，放入 37 度培養(yǎng)箱。
6 孔板、12 孔板或 24孔板，我均采用將*個孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動浸潤整個孔底。然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底。其它孔一次類推，這樣整個孔底都是濕潤的，細胞懸液會平鋪在整個孔底。
加細胞懸液的時候可以避免加在中間中間細胞多，而加在周邊晃勻后周邊細胞多中間少的現(xiàn)象，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。
這個方法就是有點慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒有 96 孔板好掌握，效果沒有 96 孔板好，所以我放棄改用浸潤孔底的方法。
細胞懸液加完后，將細胞培養(yǎng)板抬高，對著燈光，從底部往上看，看細胞有沒有抱團。然后從底部敲擊，使之分散。
如果實驗室有平板振蕩器的話，我建議用這個儀器稍振蕩一下，效果不錯，就是振幅小，頻率高的那種。
細胞要盡量打散，大部分呈單個狀態(tài)。離心后，要充分懸浮！還有轉(zhuǎn)移到六孔板后，是要晃得。晃的時候不要讓那個細胞液轉(zhuǎn)圈，不然細胞就全被帶到中間去了，就會不均勻。
一瓶細胞長滿后，正常處理，在培養(yǎng)瓶里吹勻。然后鋪 6 孔板，每孔 2 毫升，鋪完之后不用觀察直接用酒精棉擦拭。然后放到培養(yǎng)箱里，輕微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。基本上 24 小時之后觀察每孔的細胞都會很均勻。
計算好所需要的全部液體量和細胞量，混勻后，加到六孔板里，六孔板按橫 8 字型晃。顯微鏡下觀察，如果不均勻，按上述方法再晃。如果細胞未計數(shù)直接種的話，在種六孔板的過程中，隨時晃一下混勻用的瓶子，瓶子我通常是順時針或逆時針轉(zhuǎn)圈。
放在水平板面上先上下移動，再左右移動，每個方向５到６次，但關(guān)鍵的是搖完后直接放入培養(yǎng)箱中，不要再做過多的運動，例如放到鏡下去看，否則很容易就又聚到中間去了。