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         標準GB 5009.296-2023的前身是GB 5009.82-2016,現在食品中維生素A、E繼續使用標準GB 5009.82-2016，維生素D單獨實行標準GB 5009.296-2023。本文將重點介紹GB 5009.296-2023標準中3個方法實驗中的注意要點，與大家分享與交流。

        在方法解讀之前，可以先了解下維生素D來源和性質，在后續實驗中才能更好的提取目標物。

一、維生素D的來源：

二、維生素A、D、E性質

三、第一法 正相色譜凈化-反相液相色譜法的注意要點

1、取樣量嚴格按照標準的不同基質的取樣量，因為干法工藝，取樣量少會影響均勻性。

2、上機前，為了保護正向硅膠柱，提取液水洗后，必須用無水硫酸鎂鈉粉末脫水至無水狀態。

3、為保證儀器靈敏度，正向色譜進樣量：500μL；反相色譜進樣量：100μL;

4、濃縮時，大體積石油醚待濃縮液，可選用萊奧12位全自動氮吹濃縮儀，可支持自動定容到1ml，再氮吹到近干；大體積氮吹時，實驗員可解放雙手，無需值守，并且確保氮吹不會吹到干。防止維生素D附著壁上，影響回收率。

Leowlab SmartVap N12

萊奧12位全自動定量濃縮儀

5、內標法和外標法的選擇？首先確定樣品是否含有維生素D2和D3.

四、第二法 在線柱切換-反相液相色譜法的注意要點

1、關注儀器靈敏度問題，根據取樣量、定容體積、進樣量、檢測器靈敏度、檢出限綜合考慮。

2、固相萃取柱填料可選HLB，重點要保證較大的柱容量，耐堿性、耐壓性，由于樣液皂化條件是堿性的，待凈化液屬于堿性。

3、標準提到的奶粉、油脂含量高的肉類、粘稠的蜂蠟等制品屬于復雜類基質，需要過柱壓力較大，選用萊奧48位正壓固相萃取儀，針對以上復雜基質，壓力相比真空泵負壓裝置，最高可達100psi，可以輕松快速過柱。

4、固相萃取可選擇萊奧48位正壓固相萃取儀，可取代實驗室常用的真空泵負壓萃取裝置，能大大縮短萃取時間，提高萃取效率，達到很好的平行性及回收率。

Leowlab Purifier A48

萊奧48位正壓固相萃取儀

5、固相萃取儀后的液體，加入適量水，主要是克服色譜溶劑效應，改善峰型；

6、一維色譜柱可選用 PFP(五氟苯基)填料，在同時分離生育酚異構體時使用。

7、二維色譜柱可選PAH(多環芳烴)或固醇類分析C18柱。

8、捕集取柱可選C18或C8，粒徑可采用10μm填料，柱長可選用到30mm

五、第三法 液相色譜-串聯質譜法的注意要點

1、選擇硅膠基質的固相萃取柱，需要注意防水，活化則選擇有機溶劑進行活化。

2、同位素內標的選擇:維生素 D2-d3、和維生素 D3-d3;，也可使用維生素D2-d6。和維生素 D3;-d6。可綜合考慮成本;

3.質譜檢測的離子化效率的評估實驗必須開展，對于不同的基質，樣品是不一樣的。

4.質控樣品的跟進是必要的，才能驗證做的樣本結果的準確性。

5、標準提到的奶粉、油脂含量高的肉類、粘稠的蜂蠟等制品屬于復雜類基質，需要過柱壓力較大，選用萊奧48位正壓固相萃取儀，針對以上復雜基質，壓力相比真空泵負壓裝置，最高可達100psi，可以輕松快速過柱。

Leowlab Purifier A48

萊奧48位正壓固相萃取儀

六、關于我們

氮氣發生器

正壓固相萃取儀&氮吹儀

廣州萊奧實驗室科技有限公司總部位于廣州,是一家專注于有機質譜供氣及前處理儀器的高科技企業。

團隊人員擁有十幾年的質譜儀、前處理儀器、氮氣發生器從業經歷。公司服務于全國食品、制藥、臨床檢驗、環境、司法鑒定、科研院所等行業。