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大鼠Ⅱ型肺泡細胞表面抗原 （ELISA）試劑盒

ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。

利用

ELISA的基礎是抗原或抗體的固定化和抗原或抗體的酶標記。固相載體表面結合的抗原或抗體仍保留其免疫活性，而酶標抗原或抗體同時保留其免疫活性和酶活性。在測量過程中，測試樣品（其中的抗體或抗原）與固體支持物表面的抗原或抗體發生反應。在固相載體上形成的抗原抗體復合物通過洗滌與液體中的其他物質分離。然后加入酶標抗原或抗體，也通過反應與固相載體結合。此時，固相上酶的量與樣品中被測物質的量成正比。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成有色產物，產物的多少與樣品中被測物質的多少直接相關，因此可以進行定性或定量分析根據顏色深度。由于酶的高催化效率，間接放大了免疫反應的結果，并且該測定方法達到了高靈敏度。 ELISA 可用于測量抗原和抗體。

怎么做

雙抗體夾心法

1. 包被：以 0.05MPH 稀釋抗體至蛋白質含量為 1-10 μg/ml。 9. 含氧碳酸鹽涂層緩沖液。向每個聚苯乙烯板的反應孔中加入 0.1 ml，并在 4 °C 下孵育過夜。次日，棄孔中的溶液，用洗滌緩沖液洗滌3次，每次3分鐘。 （簡稱洗滌，下同）。

2、加樣：將0.1ml稀釋后的待測樣品加入上述包被的反應孔中，37℃孵育1小時。然后洗。 （同時制作空白孔、陰性對照孔和陽性對照孔）。

3、加入酶標抗體：在每個反應孔中加入0.1ml新鮮稀釋的酶標抗體（滴定后稀釋）。在 37°C 下孵育 0.5 至 1 小時并洗滌。

4 加入底物顯色液：在每個反應孔中加入 0.1 ml 臨時配制的 TMB 底物溶液，37°C 孵育 10-30 分鐘。

5. 反應終止：每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸。

6、結果判斷：在白色背景下，肉眼可直接觀察結果：反應孔顏色越深，陽性程度越強，陰性反應無色或極淺。 “-"符號表示。 OD值也可以測量：在ELISA檢測器上，在450nm（ABTS顯色時為410nm），用空白對照孔調零后測量各孔OD值，如果大于2.1倍陰性對照的OD值，即陽性。

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