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大鼠AMPA離子能谷氨酸受體1 （ELISA）試劑盒

預防措施

ELISA試劑盒檢測時的注意事項

1. ELISA 實驗的一般規則

1、為保證移液槍的準確性，誤差不能超過2%。可用水和電子天平測定。但最好請專業人士糾正。

2、可配20ul、50ul、100ul、1000ul各一支槍。吸出不同的液體后，更換移液器吸頭。即使在吸氣標準時。

3. 實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，讓所有試劑回到室溫，使結果更穩定。

4. 實驗過程中，基板應避光。

5、用槍吸液體時，速度不能太快，以免產生氣泡，吸不準。

6、吸液時，請使用范圍接近所需量的槍，以減少誤差。

7、在酶標孔中加入液體時，避免吸頭與孔內液體接觸，使吸頭上的液滴與孔壁接觸，液滴自然流下。

8. 加完所有液體后，平行輕輕搖動桌面上的ELISA板30秒，使液體混合。也可以使用酶標儀的搖動功能。

9. 溫水浴時，用不干膠或膠帶紙將ELISA板密封，防止水分蒸發。

10、洗板時，每次加入洗劑后，應靜置1分鐘，使清洗更*。如果沒有洗板機，請在除去液體后在報紙或羊毛紙上將盤子拍干。

11、當洗液不夠時，可用蒸餾水配制PH7.4，0.02M磷酸鹽緩沖液，加入0.1% Tween 20作為洗液。加入1/1000的后可長期保存。

12、基材對光敏感，使用前應立即準備。

13、檢測前，打開酶標儀，使其穩定10分鐘以上。

14、底物有一定毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免。

15、待測樣品應澄清，否則會影響結果。

16、溫水浴時間應符合試劑盒規定。

17、盡量做雙孔實驗，以保證數據的準確性。

18、結果有問題的樣品，應采用其他方法確認。

可以總結為四個方面：

1. 用于定位各種細胞內成分的免疫酶染色。

2.研究抗酶抗體的合成。

3. 出現少量免疫沉淀。

4、體液中抗原或抗體成分的定量檢測。

二、下面所提到的是針對我公司的ELISA產品會出現的問題及解決辦法

1. 加入反應終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標記物。

解決辦法：請按照操作步驟進行。

b.原因：試劑盒內容物未能充分回。

解決辦法：確定試劑盒內容物回溫后再進行操作。

c.原因：室溫太低。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當延長溫育時間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過有效期限。

解決辦法：請更換成仍在有效期限內的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)。

b.原因：操作時間拖太久。

解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。

c.原因：微孔間相互污染。

解決辦法： 加樣品時，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標準品或酶標記物所加入的量不一致。

解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。

解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。

f.原因：洗板過程發生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。

解決辦法：請隨時監控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發現底物溶液已呈現淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應時間超過太久。

解決辦法：請控制反應時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過程發生問題(同2-f.)。

解決辦法：請參考2-f.

c.原因：添加樣品或酶標記物的量不一致。

解決辦法： 請參考2-d.

該IBL試劑盒可用于小鼠血清、EDTA血漿和細胞上清液中IL-6的定量檢測

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