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EcoRI 快速內切酶
產品貨號：F5536S
儲存條件：-20℃
同裂酶：FunII
注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。
產品組成
組分 | 規格 |
LabFD™ EcoRI | 600ul |
10×LabFD™ Buffer | 3×1ml |
10×LabFD™ Color Buffer | 3×1ml |
產品簡介
LabFD™快速內切酶是一系列經過基因工程重組、能夠在5~15 分鐘內精確完成 DNA 切割的限制性內切酶，適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。LabFD™ 快速內切酶具有如下特點：5~15 分鐘內即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體系；良好的酶活冗余度，輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD生命去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer 中具有baifenzhibai活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體驗。
建議的反應條件：
1× LabFD™緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA快速酶切流程"配制反應體系
失活條件
80℃溫育20min。
質量控制
功能活性檢測
最shi反應溫度下，在20ul反應體系中，1ul LabFD™EcoRI能夠在15min 內*消化1ug λDNA。
超長時間溫育檢測
最shi反應溫度下，將 1ul LabFD™ EcoRI 與 1ugλDNA共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現星號活性。
酶切-連接-再酶切檢測
最shi反應溫度下，使用 1ul LabFD™ EcoRI消化底物，回收酶切產物。在22℃下使用適量Fast T4 DNALigase可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。
非特異性內切酶活性檢測
最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ EcoRI與1ug超螺旋質粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒DNA仍然處于超螺旋狀態。
藍白斑檢測
將含有單lacZα基因的載體以1ul LabFD™ EcoRI消化，重新連接后轉化入大腸桿菌感受態細胞，涂布在含有對應抗生素、IPTG 和X-gal的LB培養基平板上。連接正確的產物會生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產物將得到白色菌落。對于LabFD™系列限制酶而言，白色菌落比例應小于1%。
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