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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
詳細(xì)介紹
?載體大小：4.5 kb-11.5 kb
?轉(zhuǎn)染方式：直接轉(zhuǎn)染或通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染
?兩種標(biāo)記可選：mCherry/GFP等熒光標(biāo)記 Puro/Zeocin/Neomycin等藥物標(biāo)記
1. CRISPR KI donor載體
產(chǎn)品介紹
CRISPR KI donor載體是由pUC19質(zhì)粒改造而來(lái)。可直接轉(zhuǎn)染或通過(guò)電轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞。該質(zhì)粒含有eGFP及PuroR篩選基因插入元件，元件兩側(cè)含有多個(gè)酶切位點(diǎn)，可供插入knock in所需的左右同源臂。經(jīng)過(guò)改造的載體可與spCas9及sgRNA共同作用，達(dá)到在特定基因組位點(diǎn)插入含eGFP和Puro抗性基因的目的。
本產(chǎn)品通過(guò)冰盒運(yùn)輸，到貨后請(qǐng)立即放入-20℃冰箱保存。產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱 | CRISPR KI donor 載體 |
載體大小 | 4.5 kb |
左側(cè)克隆位點(diǎn) | Hind Ⅲ、Sph Ⅰ、Sal Ⅰ |
右側(cè)克隆位點(diǎn) | Mlu Ⅰ、Kpn Ⅰ、EcoR Ⅰ |
產(chǎn)品規(guī)格 | 10 μg/支 |
載體示意圖
2. sgRNA-Puro/mCherry病毒載體等
產(chǎn)品介紹
CRISPR/Cas9 sgRNA病毒載體是慢病毒系統(tǒng)質(zhì)粒，可直接轉(zhuǎn)染或通過(guò)包裝病毒感染細(xì)胞。該質(zhì)粒含有g(shù)RNA骨架結(jié)構(gòu)及兩種標(biāo)記以篩選標(biāo)記基因，客戶自行插入靶基因的特定sgRNA序列后，與spCas9共同作用，達(dá)到基因編輯的目的。
本產(chǎn)品通過(guò)冰盒運(yùn)輸，到貨后請(qǐng)立即放入-20℃冰箱保存。CRISPR/Cas9 sgRNA質(zhì)粒載體
產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 載體大小 | sgRNA克隆位點(diǎn) | Esp3 Ⅰ 酶切后片段大小 | 產(chǎn)品規(guī)格 |
sgRNA-Puro/mCherry病毒載體 | GE-20005-PC | 11.5 kb | Esp3 Ⅰ | 2 kb+9.5 kb | 10 μg/支 |
sgRNA-mCherry病毒載體 | GE-20005-C | 9 kb | Esp3 Ⅰ | 2 kb+7 kb | 10 μg/支 |
sgRNA-GFP病毒載體 | GE-20005-G | 9 kb | Esp3 Ⅰ | 2 kb+7 kb | 10 μg/支 |
sgRNA-Zeocin病毒載體 | GE-20005-Z | 9 kb | Esp3 Ⅰ | 2 kb+7 kb | 10 μg/支 |
sgRNA-Neomycin病毒載體 | GE-20005-N | 9 kb | Esp3 Ⅰ | 2 kb+7 kb | 10 μg/支 |
sgRNA-Puro病毒載體 | GE-20005-P | 9 kb | Esp3 Ⅰ | 2 kb+7 kb | 10 μg/支 |
sgRNA-Puro/GFP病毒載體 | GE-20005-PG | 11.5 kb | Esp3 Ⅰ | 2 kb+9.5 kb | 10 μg/支 |
使用說(shuō)明
（請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀使用說(shuō)明后再開(kāi)始相關(guān)實(shí)驗(yàn)）
1.從-20℃冰箱中取出CRISPR/Cas9 sgRNA病毒載體，4℃融化2.配置酶切反應(yīng)液
3.37℃，酶切0.5 h
4.終止酶切反應(yīng)液，將反應(yīng)液加到1%瓊脂糖凝膠孔，跑膠30 min，回收片段，與退火獲得的sgRNA靶向序列做連接反應(yīng)
5.連接產(chǎn)物通過(guò)轉(zhuǎn)化獲得陽(yáng)性克隆，測(cè)序成功后經(jīng)過(guò)質(zhì)粒抽提即可使用