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產品簡介
詳細介紹
人CD34+造血干/前體細胞擴增試劑盒是為在體外培養和擴增人CD34+造血干/前體細胞而專門設計的一款含血清培養基套裝。該試劑盒可在7天內誘導人CD34+造血干/前體細胞擴增達~10倍，是研究人CD34+造血干/前體細胞擴增和功能、以及產生人CD34+造血干/前體細胞的重要培養系統。
產品特點
針對人CD34+造血干/前體細胞擴增設計而成
產品成分
產品名稱 | Catlog# | 規格 | 儲存條件 |
人CD34+造血干/前體細胞擴增試劑盒 | CS-20008-50 | 1 kit | |
人CD34+造血干/前體細胞基礎培養基 | CS-20008-B | 50ml | 4℃ |
人CD34+造血干/前體細胞擴增補充因子 | CS-20008-EXS | 0.5ml | -20℃ |
預篩選造血干/前體細胞專用胎牛血清 | CS-HSCF-5 | 5ml | -20℃ |
其他本試劑盒未提供但需用的重要試劑和組分
人CD34+細胞磁珠分選試劑
MS5基質細胞
*培養基配制
(在無菌生物安全柜中，開展以下操作)
1.在4℃冰箱解凍補充因子和胎牛血清，混勻后使用。
注：解凍后的補充因子和血清可放置于4℃冰箱，在1個月內使用；或者分裝至合適體積后，保存于-20℃冰箱，不可反復凍融！2.擴增培養基配制：將1體積的擴增補充因子和10體積的血清加入到89體積的基礎培養基中，充分混勻，得到人CD34+造血干/前體細胞擴增培養基。如取100ul補充因子和1ml血清加入至8.9ml基礎培養基，以此類推。
注：配好的*培養基請于4℃保存，且于1個月內使用完畢。使用說明
(請詳細閱讀使用說明后再開始相關實驗)
1.D0：收集培養的MS5細胞，使用含10ng/ml的培養基重懸細胞，調整細胞密度至＜1*10^7/ml，置于細胞培養箱中，37℃，5% CO2，孵育3小時。
2.使用20ml含有2.5%血清的PBS緩沖液*清洗MS5細胞
3.重復步驟2.
4.使用MS5培養基重懸細胞，調整細胞密度為2.5*10^5/ml，按照如下表格鋪于培養板，過夜培養使細胞貼壁：
培養板 | MS5培養基體積 | MS5細胞數/孔 |
96孔板 | 0.1ml | 2.5*10^4 |
24孔板 | 0.5ml | 1.25*10^5 |
5.D1：使用磁珠分選人CD34+造血干/前體細胞（參考所使用試劑盒的說明書)，計數。
注：G-CSF富集的健康供體每100ml外周血中約含有5*10^5CD34+造血干/前體細胞。
6.使用擴增培養基重懸CD34+造血干/前體細胞，調整細胞密度至5*10^4/ml，按照如下表格所示將細胞鋪于培養板（鋪板之前去除MS5培養基）：
培養板 | 擴增培養基體積 | CD34+造血干/前體細胞數/孔 |
96孔板 | 0.2ml | 1.0*10^4 |
24孔板 | 0.1ml | 5.0*10^4 |
7.將培養板置于細胞培養箱，37℃，5%CO2，靜置培養。
8.D3：半量換液。小心貼培養板側壁用槍尖吸走1/2體積舊培養基，補充加入新鮮擴增培養基至初始培養體積（步驟6表格）。
注：*培養基請恢復至室溫后使用，減少對細胞的刺激；9.D6：半量換液，同步驟8.
10.D7：輕輕吹打細胞，收集懸浮細胞，即為擴增的人CD34+造血干/前體細胞，可進行后續操作和分析。
注：此步驟需輕柔吹打細胞，以免MS5基質細胞脫落。一般來說，MS5基質細胞貼壁牢固，輕柔吹打不會導致MS5脫落，操作人員可在顯微鏡下觀察確認MS5脫落情況。數據展示
圖：人CD34+造血干/前體細胞擴增鑒定。磁珠分選的人CD34+造血干/前體細胞按照上述說明培養7天后，進行表型鑒定及擴增倍數鑒定。