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保存蛋白質的原則及方法有哪些?

閱讀:2147      發布時間:2024-1-8
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在完成蛋白質純化后,如果保存不當,容易發生失活和變性的情況,那么你知道保存蛋白質的原則及方法有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!

一、原則

1. 低溫

保存蛋白質時,確保在低溫條件下至關重要。低溫意味著較低的能量水平,有助于減緩蛋白質分子內部的熱運動,減少鍵的斷裂可能性。此外,在低溫下,微生物繁殖減緩,潛在的蛋白酶活性降低,從而有助于維持蛋白質的活性。

2. 無菌

在進行蛋白質實驗操作時,務必佩戴手套。盡管實驗室戴手套通常是為了保護實驗者自身,但在生化實驗中,蛋白質是我們需要保護的主體。我們皮膚上存在一些蛋白酶,可能會降解蛋白樣品。此外,皮膚上的其他化學物質也可能污染蛋白樣品。為了防止細菌生長,最好將蛋白質保存在經過滅菌處理的容器中。

3. 濃度

為了提高蛋白質的穩定性,建議以較高濃度保存重組蛋白質,最好保持在1mg/ml以上。高濃度有助于防止蛋白質分子附著在塑料或玻璃管壁上。不容忽視的是,疏水性蛋白質容易附著在管壁上。

4. 分裝

蛋白質需要冷凍保存,但在實驗中常在室溫或更高溫度使用。反復凍融過程中產生的冰晶會損害蛋白質的結構和構象。為減少凍融次數,建議將純化后的蛋白質進行分裝保存,每次使用前融化所需量,以確保蛋白質樣品經歷單次凍融。

二、保存

1. 長期保存

對于凍干狀態的重組蛋白,由于處于wan全脫水的狀態,在不受潮的情況下可以在冰箱中保存數年。

對于復融后的重組蛋白,比較合適的保存方式是分裝后保存在 -20°C 或 -80°C,六個月內一般是沒有問題的。

(1)分裝有助于zui大程度減少反復凍融對抗體和重組蛋白活性的損害,并減少從同一管中多次吸取可能導致的污染。

(2)分裝的量最好按一次實驗用完為準,每份至少不能少于10 µl。體積越小,蛋白濃度受蒸發和管壁吸附影響的可能性越大。

(3)復融后的分裝重組蛋白如果一次用不完,將剩余母液保存在 4℃,避免再凍起來。

(4)蛋白工作液應當在當天配制并當天使用,最好不要在4℃超過1天。

2. 短期保存

對于短期保存,大多數蛋白質可以在4°C下保存,以避免反復凍融對活性的影響。然而,4°C保存面臨微生物污染的問題。因此,如果保存時間超過24小時,建議使用0.22微米的濾膜過濾樣品,然后在無菌管中保存。值得注意的是,并非所有蛋白質都適合在4°C下保存。

更多有關保存蛋白質的原則及方法,請聯系天津益元利康生物科技有限公司。


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