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你知道什么是二抗嗎？讓我們一起來看看吧！

一、二抗的定義

第二抗體（二抗）是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。二抗是利用一抗是大分子的蛋白質具有抗原性的性質，去免疫異種動物，由異種動物的免疫系統產生的針對于此抗體的免疫球蛋白。二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM或IgA等）均具有反應性。

二、二抗的設計原理

根據同一種來源的同種亞型抗體的恒定區是保守的，以此充當抗原刺激機體產生的抗體可以識別同種亞型一抗，根據這一原理設計制備二抗。

抗IgG (H+L)恒定區：靶向一抗的重鏈和輕鏈恒定區。這些抗體也會與其他類(如IgE、IgD等)發生反應，因為這些類之間共享輕鏈。更廣泛的表位識別(H+L)二抗使其適用于大多數需要二抗的免疫分析。

抗IgG Fc片段或重鏈恒定區：與抗IgG (H+L)二抗不同，靶向一抗Fc區域或重鏈的二抗具有類特異性，不會與其他類免疫球蛋白發生反應，因為每一種抗體的重鏈或者Fc片段是不一樣的（見圖2）。如果打算在Ip后進行Western blotting分析，建議使用重鏈特異性二抗來檢測位于25kDa分子量附近的目標蛋白，以避免輕鏈的干擾。此外，Fab片段抗Fc二抗可用于一抗在多次標記實驗孵育前預標記。

抗IgG輕鏈恒定區:靶向一抗的輕鏈(kappa或lambda)。這些抗體不與一抗重鏈反應，但識別其他免疫球蛋白類的共享輕鏈。例如，山羊抗人IgG Kappa輕鏈二抗不僅能識別IgG亞類，還能識別IgA、IgD、IgE、IgM等輕鏈。在Ip后進行Western blotting分析時，建議使用輕鏈特異性二抗來檢測來檢測位于55kDa分子量附近的目標蛋白，以避免重鏈的干擾。

抗IgG F(ab’)2片段恒定區：靶向于一抗的F(ab’)2片段區。由于識別了F(ab)區域的共享輕鏈，它們會與IgA、IgD、IgE、IgM等輕鏈發生反應。

三、二抗的優勢

與僅使用標記一抗直接檢測目標物相比，使用二抗識別一抗間接檢測目標物具備多種優勢。

通用性：二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節省了時間和費用。

放大信號：一個一抗分子可以同時結合幾個標記二抗分子，從而增強信號并提高檢測靈敏度。在有些檢測中，可使用生物素化的二抗和鏈霉親和素偶聯的標記分子來進一步增強信號。

允許進行多重檢測實驗：由于二抗具有物種特異性，因此可以將實驗設計為使用源自不同物種的一抗來檢測多種目標物。使用與具有不同波長發射光的熒光染料標記的二抗來檢測不同的目標物。

保留互補位：一抗與標記分子的偶聯，有可能會影響其抗原結合位點，也稱為互補位。這將降低一抗與其靶抗原結合的能力。使用標記二抗后，可以在檢測中使用未偶聯的一抗而避免影響其與抗原的結合。

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