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[供應(yīng)]南京科捷高效液相色譜儀原理、臨床應(yīng)用及常見(jiàn)故障處理
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  • 南京科捷高效液相色譜儀原理、臨床應(yīng)用及常見(jiàn)故障處理
貨物所在地:
江蘇南京市
更新時(shí)間:
2021-10-12 21:00:07
有效期:
2021年10月12日 -- 2022年4月12日
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隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,要求分離出入體中某種特定化合物,并給予定性分析和定量測(cè)定

詳細(xì)介紹

【科捷儀器】

  由于高效液相色譜系統(tǒng)在醫(yī)學(xué)界的用戶(hù)越來(lái)越多,了解高效液相色譜技術(shù)和儀器裝置及工作原理很有必要。南京科捷在本文中簡(jiǎn)述高效液相色譜技術(shù)的系統(tǒng)組成、工作原理、臨床應(yīng)用及常見(jiàn)故障處理。

1   高效液相色譜法(High Perfor mance Liquid Chrom atograph Y HPLC)

    隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,要求分離出入體中某種特定化合物,并給予定性分析和定量測(cè)定。色譜技術(shù)是一種常用的分離技術(shù),它的分離原理是基于混合物中各組分在經(jīng)過(guò)一個(gè)由固定相和流動(dòng)相組成的體系時(shí),由于各組分在化學(xué)性質(zhì)上的差異,在兩相中具有不同的分配系數(shù),兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),被分析的混合組分隨流動(dòng)相一起運(yùn)動(dòng),并在兩相中進(jìn)行多次的吸附和分配,使得那些分配系數(shù)只有很小差別的組分。在移動(dòng)速度上產(chǎn)生很大差別,從而使各組分得到分離。通俗地說(shuō)流動(dòng)相就是帶動(dòng)樣品在色譜柱里流動(dòng)的物質(zhì),它相當(dāng)于溶劑,固定相就是填充在柱子里的物質(zhì),它相當(dāng)于吸附劑。每種固定相都具有不同的性質(zhì)。

    流動(dòng)相是氣體的叫氣相色譜。流動(dòng)相是液體的就叫液相色譜。氣相色譜法具有快速,分離效率高。用樣量少等特點(diǎn),但要求樣品能夠汽化。從而受到樣品的揮發(fā)性限制。

    高效液相色譜法(HPLC)是由現(xiàn)代高壓技術(shù)與傳統(tǒng)的液相色譜方法相結(jié)合,加上高效柱填充物和高靈敏檢測(cè)器所發(fā)展起來(lái)的新型分離分析技術(shù)。由于它只要求樣品能制成溶液,而不需要汽化,因此不受樣品揮發(fā)性的約束。對(duì)于揮發(fā)性低,熱穩(wěn)定性差,分子量大的高分子化合物以及離子型化合物尤為有利。如氨基酸、蛋白質(zhì)、生物堿、核酸、甾體、脂類(lèi)、維生素、抗生素等分子量較大。沸點(diǎn)較高的合成藥物以及無(wú)機(jī)鹽類(lèi)。所以說(shuō)HPLC具有適用范圍廣、分離效率高、速度快、流動(dòng)相可選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、流出組分容易收集等優(yōu)點(diǎn)。

    不同種類(lèi)的柱可以進(jìn)行不同類(lèi)型的液相色譜分離,也產(chǎn)生了不同的液相色譜法。如正向色譜、反向色譜、離子對(duì)色譜、離子交換色譜、凝膠色譜等。

2  高效液相色譜系統(tǒng)及工作原理

    高效液相色譜系統(tǒng)流程如圖1所示

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圖1高效液相色譜系統(tǒng)流程圖

    由流程圖可看出系統(tǒng)是由儲(chǔ)液器,泵,進(jìn)樣器,分離柱,檢測(cè)器,數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入進(jìn)樣系統(tǒng)或進(jìn)樣器。樣品通過(guò)進(jìn)樣器以精確的體積插入流動(dòng)相中。再被流動(dòng)相帶到柱內(nèi),分離過(guò)程在柱內(nèi)進(jìn)行,被分離成單個(gè)組分的樣品依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器樣品濃度被轉(zhuǎn)變成電信號(hào)送到記錄器和數(shù)據(jù)系統(tǒng),經(jīng)系統(tǒng)處理。數(shù)據(jù)以圖譜和圖表形式打印出來(lái)。

3  高效液相色譜儀在醫(yī)院臨床中的應(yīng)用

    HPLC技術(shù)主要應(yīng)用是在臨床藥學(xué)和臨床學(xué)中。臨床藥學(xué)主要是治療藥物監(jiān)測(cè)(TDM)和藥代動(dòng)力學(xué)。HPLC之所以在TDM中占有重要地位。其主要原因是:

    (1)可以同時(shí)監(jiān)測(cè)不同種類(lèi)的藥物。

    (2)一次進(jìn)樣可同時(shí)分析原藥及代謝產(chǎn)物。

    (3)分離和定量同時(shí)進(jìn)行.具有較高的準(zhǔn)確性和精確度。此外HPLC還具有*的經(jīng)濟(jì)效益比,花費(fèi)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其它傳統(tǒng)方法。目前用HPLC分析臨床常用藥物超過(guò)數(shù)百種。已廣泛用于TDM中的如抗癲癇藥,抗心律失常藥。茶堿.撲熱息痛,環(huán)孢霉索等。在臨床研究方面,許多復(fù)雜化合物或內(nèi)源代謝物也可用HPLC法分析。如血中兒茶酚胺、氨基酸、激素、前列腺素、多肽、核酸等。
此外HPLC還可應(yīng)用到臨床診斷中,如在新生兒疾病篩查中,開(kāi)發(fā)了血紅蛋白病的Hb,苯丙酮尿酸癥的PKU,成神經(jīng)細(xì)胞瘤等方法。

    需要注意的是臨床樣品都是生物樣品,如血、尿、痰、體液等,成分復(fù)雜,性質(zhì)各異,生物大分子多,必須進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚恚コ承└蓴_物。處理時(shí)嚴(yán)格按要求去做,否則會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或造成柱的阻塞,甚至報(bào)廢。

 

4  高效液相色譜儀常見(jiàn)故障處理

    故障l  系統(tǒng)壓力不穩(wěn),噪音增加,色譜圖上出現(xiàn)毛刺。

    原因  管道中吸入空氣,溶人流動(dòng)相中的空氣.泵墊圈磨損引起的泄漏,微粒污染單向閥均可引起上述癥狀。

    處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量,保證不銹鋼濾器(沉子)沉人儲(chǔ)液器瓶底,避免吸入空氣。流動(dòng)相要充分脫氣。泵墊圈是系統(tǒng)中zui易磨損的部件,泵墊圈的磨損易造成高壓下的壓力不穩(wěn),并會(huì)由泵頭滲出流動(dòng)相,一旦發(fā)現(xiàn)立即換上新墊圈,有條件的應(yīng)定期更換泵墊圈。上述問(wèn)題解決后泵仍不能正常工作,考慮單向閥的微粒污染問(wèn)題。小心地拆下單向閥,放入10%的硝酸溶液中超聲清洗15分鐘.再反復(fù)用色譜級(jí)水清洗數(shù)遍,zui后用甲醇清洗兩次,用洗耳球由進(jìn)液方向反吸氣,如不通氣說(shuō)明故障已排除,裝上單向閥即可。

 

    故障2  柱壓高。

    原因  一是樣品沉積在柱內(nèi),二是柱內(nèi)濾片阻塞。

    處理  對(duì)*種情況,可用能溶解所測(cè)樣品的溶劑沖洗,沖洗時(shí)拆開(kāi)柱與檢測(cè)器之間的接頭,正向沖洗,或?qū)⒅隹诮釉诒蒙戏聪驔_洗。注意不要讓沖洗液通過(guò)檢測(cè)器流動(dòng)池,避免流動(dòng)池污染。沖洗30分鐘后接上檢測(cè)器。若沖洗不見(jiàn)效,考慮第二種情況,更換柱頭濾片。

 

    故障3  出峰不佳,峰分叉(雙峰)。

    原因  柱頭填料塌陷。

    處理  擰開(kāi)柱頭,取出濾片,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料),裝入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷.再填,用與柱內(nèi)徑相同的頂端平面光滑的不銹鋼桿壓緊,再填平,滴甲醇。再壓緊反復(fù)幾次,直至裝滿(mǎn)填平。擦干凈柱外壁的填料,加上新濾片,擰緊柱頭,接上泵沖洗,用流動(dòng)相沖洗30分鐘后再接檢測(cè)器。

 

    故障4  換柱后出現(xiàn)峰肩。

    原因  柱安裝位置不佳。

    處理  松開(kāi)柱,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一角度,重新安裝上緊,*甲醇沖洗30分鐘即可。

 

    故障5  峰面積改變。

    原因  加樣針不到位。

    處理檢查加樣針是否插到底.保證針到位。實(shí)際工作中碰到的問(wèn)題很多,日常保養(yǎng)很重要。如儲(chǔ)液器的清潔,流動(dòng)相的脫氣,每天用后系統(tǒng)中的緩沖液要沖洗干凈。先用蒸餾水沖洗15分鐘,然后用甲醇沖洗,防止無(wú)機(jī)鹽沉積造成系統(tǒng)內(nèi)的磨損和阻塞,這些都可以減少故障的發(fā)生。另外對(duì)HPLC技術(shù)及設(shè)備原理的了解也非常重要,這樣就能夠提高儀器的利用率,更好地發(fā)揮儀器作用。

 

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