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大家有沒有試過，把培養基凍起來，顏色會有變化嗎？顏色一開始變黃！解凍以后，又會慢慢變紅！為什么呢？

如果凍的液體是水，或是緩沖液，顏色會有變化嗎？

并不會有變化！

原因是因為，培養基中會加入酸堿指示劑，例如酚紅，用于檢測培養基的酸堿性。當培養基酸性增加時，酚紅會呈現黃色，當培養基堿性增加時，酚紅會呈現紅色。

在細胞培養過程中，細胞代謝會產生酸性代謝產物，使培養基酸性增加，因此培養基會逐漸變黃。當培養基解凍后，酸性代謝產物逐漸消耗，培養基的酸性減少，導致酚紅顏色逐漸變回紅色。

如果凍結的液體是水或緩沖液，一般不會出現顏色的變化。這是因為水和緩沖液不含有酸堿指示劑，所以當其凍結和解凍時，顏色不會發生變化。

為什么細胞培養基冷凍以后，會變酸呢？

細胞培養基凍結后變酸的原因是由于冰凍過程中，液體中的二氧化碳和其他氣體會逸出。冰結過程中，水分子會有序排列形成晶體，氣體無法溶解在冰中，因此逸出。培養基中二氧化碳的減少會導致酸堿度的變化，使培養基變酸，從而導致培養基的顏色變黃。

培養箱的CO2濃度為什么要設置5%？

培養箱的CO2濃度設置為5%是為了模擬細胞/組織在生物體內的生長環境，并提供適合細胞體外培養的條件。培養箱要求穩定的溫度、CO2水平、酸堿度和濕度，其中CO2濃度的穩定性對細胞培養非常重要。

以常用的細胞培養基DMEM為例，其碳酸氫鈉濃度為1.5g/L。廠家已經測試好對應的培養箱濃度在5%左右，假如該培養基碳酸氫鈉濃度變為3g/L，則培養箱CO2濃度應維持在10%。

國外常用的培養條件就是，1升培養基里含3克NaCO3，CO2培養箱的濃度是10%。而國內大多數是5%的濃度，相對應的培養基內碳酸氫鈉濃度就在1.5g/L左右。