兔軟骨細胞
產品名稱 ：兔軟骨細胞
產品貨號 ：YLK-XB1029h
組織來源 ：軟骨組織
產品規格 ：5×105cells/T25細胞培養瓶
細胞簡介：
軟骨細胞分離自關節軟骨組織；關節軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結締組織的膠原纖維構成的基本框架，這種框架呈半環形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質上，上端朝向關節面，這種結構使關節軟骨緊緊與骨結合起來而不會掉下來，同時當受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。
在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關節軟骨的正常代謝。關節軟骨沒有神經支配，也沒有血管，其營養成分必須從關節液中取得，而其代謝廢物也必須排至關節液中，關節軟骨的這種營養代謝必須通過關節運動，使關節軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關節運動對于維持關節軟骨的正常結構起重要的作用。
關節軟骨細胞位于關節軟骨陷窩內。幼稚的關節軟骨細胞位于關節軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節軟骨表面平行，越向深層的關節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關節軟骨細胞多 2-8 個成群分布于關節軟骨陷窩內，這些關節軟骨細胞由同一個母細胞分
裂增殖而成，稱為同源細胞群。
電鏡下，關節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作
用下的病理生理改變具重要意義。
細胞特性
1)組織來源于實驗動物的關節組織。
2)細胞鑒定：Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)免疫熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式：長梭狀，不規則細胞，貼壁培養。
質量檢測
優利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培 養 基 ： 含 FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin 等
換液頻率 ： 每 3-4 天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態 ： 梭形、多角形
傳代特性 ： 可傳 5 代左右；3 代以內狀態佳
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
該細胞體外培養周期有限。建議使用優利科生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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