木質素（Lignin）含量試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
木質素是構成植物細胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇構成的一類物質，存在于木質組織中，主要作用是通過形成交織網來硬化細胞壁。木質素主要位于纖維素纖維之間，起抗壓作用。
測定原理：
木質素中的酚羥基發生乙?；笤?/span>280nm處有特征吸收峰，280nm的吸光值高低與木質素含量正相關。
需自備的儀器和用品：
天平、40目篩，玻璃試管、燒杯、離心機，恒溫水浴鍋、封口膜、烘箱、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸，濃硫酸。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體100mL×1瓶，4℃保存。
樣品處理：
樣品80℃烘干至恒重，粉碎，過40目篩，稱取約2mg（記為W）于10mL玻璃試管中（務bi用玻璃試管，不可用Ep管）
測定操作表：
空白管 | 測定管 | |
樣本（mg） | 2 | |
試劑一（μL） | 500 | 500 |
高氯酸（μL） | 20 | 20 |
于10mL玻璃試管中，用封口膜密封，充分混勻，80℃水浴40min，每隔10min震蕩一次，然后自然冷卻 | ||
試劑二（μL） | 500 | 500 |
充分混勻 | ||
上清（μL） | 20 | 20 |
試劑三（μL） | 980（參照注意事項四） | 980（參照注意事項四） |
取200μL于微量石英比色皿/96孔板，測定280nm處吸光值A。分別記為A空白管和A測定管，ΔA=A測定管-A空白管 | ||
計算公式：
標準曲線：y = 0.0347x+0.0068，R2=0.9889
Lignin（mg/g干重）= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反總×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50
V反總：反應總體積：1.02mL；W：樣本質量，g；T：稀釋倍數
注意事項：
1. 試劑一有毒性，請操作時做好防護措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。
2. 加熱過程中有劇烈反應，震蕩時輕搖，以免壓力過大噴出造成人身傷害。
3. 試劑三具有強刺激性，建議操作過程全部在通風櫥子操作。
4. 取上清加試劑三步驟根據自己樣品乙?；潭?，試劑三的用量可調整，保證吸光值在0.1-0.8之間即可，并在公式中參與計算。
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