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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(S-NAG)試劑盒說明書

閱讀:436      發布時間:2023-09-20
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土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG試劑盒說明書

                                         微量法100/48

 

 

    意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:                           

S-NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶,由土壤微生物分泌。S-NAG活性變化與機體某些病理狀態密切相關。

 

測定原理:

S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算NAG活性。

 

自備用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:甲苯5mL×1瓶,4保存;(自備)

試劑二:粉劑×1瓶,-20保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20保存;

試劑三:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑四:液體15mL×1瓶,4保存;

 

樣品處理

新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干,過30~50目篩。

 

測定步驟:

1、   分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至400nm,蒸餾水調零。

2、  加樣表

試劑名稱

測定管

對照管

風干土樣(g

0.02

0.02

試劑一(μL

10

10


室溫振蕩混勻15min

90℃振蕩混勻15min

試劑二(μL

130


蒸餾水


130

試劑三(μL

160

160

混勻, 37振蕩反應1h90水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻

10000g 25離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)

上清液μL

70

70

試劑四μL

130

130

充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測定吸光值A計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。

 

S-NAG活力計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00645x -0.0054x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產生1 μmol-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反總÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)

T:反應時間,1h=1/24d V反總:反應體系總體積:3×10-4 LW:樣本質量,0.02g

 

b.96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0043x -0.0054x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產生1 μmol-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG活力(μmol/d/g 土樣)= (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反總÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)

T:反應時間,1h=1/24d V反總:反應體系總體積:3×10-4 LW:樣本質量,0.02g


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優利科(上海)生命科學有限公司

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