植物硝態氮試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
硝態氮是植物最主要的氮源。植物體內硝態氮含量反映了土壤中硝態氮的供應情況，可作為土壤氮肥的指標。測定植物體內的硝態氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營養情況，而且對鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質也有重要的意義。
測定原理：
在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算得硝態氮含量。
自備實驗用品及儀器：
蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
試劑一：粉劑×2支，4℃避光保存。臨用前根據用量每瓶加1.2mL濃硫酸充分溶解。
試劑二：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃保存。
樣本處理：
按照質量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，室溫勻漿后置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，期間不斷晃動或者置于90℃恒溫搖床中振蕩提取30min，待冷卻后于25℃，12000g離心15min，取上清待測。（深色植物勻漿后加入約3mg試劑三后再提取）
測定操作表：
分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長至410nm，蒸餾水調零。
1、 在EP管中如下表加樣
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 10 | |
蒸餾水（μL） | 10 | |
試劑一（μL） | 20 | 20 |
充分混勻，25℃靜置30min | ||
試劑二（μL） | 475 | 475 |
混勻，渦旋振蕩，使出現的沉淀充分溶解，轉移200uL至微量石英比色皿/96孔板中測定410nm處吸光值A，△A=A測定管-A空白管 | ||
注意：空白管只需測定一次。
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N含量（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V樣總）
=64.1×（△A-0.0073）÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
a. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V樣總）
=128.2×（△A-0.0073）÷W
V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
注意事項：
1. 試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。
2. 試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。
3. Z低檢出限為2μg/g。
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