問(wèn)題：                                      

不同色譜柱間差異  
使用期間柱變化  
原因：    
填料、鍵合不相同  
柱床破壞  
鍵合相丟失  
硅膠基質(zhì)溶解  
強(qiáng)保留組分堆積堵塞  
表現(xiàn)：  
保留因子（k)，分離因子（α)  
柱效（N)  
保留因子（k)，分離因子（α)  
柱效（N)  
保留因子（k)，柱效（N)  
問(wèn)題：   
柱外效應(yīng)  
原因：  
系統(tǒng)差異、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)、檢測(cè)器流通池體積大、接頭死體積大等。   
表現(xiàn)：  
柱效（N）  
問(wèn)題：  
分離效果變差   
原因：  
流動(dòng)相組分改變  
流速改變  
溫度改變  
表現(xiàn)：  
保留因子（k)，柱效變化很小  
保留因子（k)，分離因子（α）  
保留因子（k)，柱效變化很小  
問(wèn)題：  
柱平衡慢  
原因：  
重新平衡時(shí)間不夠   
柱超載 樣品量太大   
表現(xiàn)：  
保留因子（k)，柱效變化很小  
保留因子(k)，柱效(N)  
造成色譜峰（ 不對(duì)稱(chēng)）拖尾的原因  
1．色譜柱本身填裝問(wèn)題，篩板堵塞或填料塌陷；  
2．柱頭有污染；  
3．樣品超載；  
4．樣品溶劑不合適；  
5．柱外效應(yīng)；  
6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；  
7． 緩沖容量不足或不合適；  
8． 重金屬污染。  
如何解決峰形拖尾的問(wèn)題  
A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問(wèn)題  
1．流動(dòng)相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；  
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；  
3.降低進(jìn)樣量至<1μg。  
B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問(wèn)題  
1.如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；  
2.使用保護(hù)柱。  
C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬  
1.進(jìn)樣體積過(guò)大，（通?！?5μL）；  
2.進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測(cè)器之間的管路體積過(guò)大（連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）；  
3.檢測(cè)器流通池的體積過(guò)大。