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迎接 2025 版《中國藥典》丨安捷倫生物制藥解決方案為 ADC 分析提供尖兵利器
2025 版《中國藥典》即將頒布和實施，三部生物制品部分新增至少 10 項生物制品通用技術要求，新增 10 個品種各論和修改 80 個已收載品種各論，安捷倫正在持續推出基于 2025 版藥典變化的系列應用新方案。其中新增《人用抗體偶聯藥物制品總論》最為引人關注，本篇主要介紹安捷倫 ADC DAR 值平臺分析方法及應用，包括 QTOF 平臺（Native SEC-MS 和 RP-MS），HIC-LC 和還原 RP-LC 平臺，結合應用場景和平臺優勢，推薦不同的 DAR 值檢測方法平臺。
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人用抗體偶聯藥物（ADC）系由抗體和有效載荷（payload）通過連接子（linker）偶聯而成的治療用藥物。Drug-to-antibody ratio (DAR) 是每個抗體分子上偶聯的有效載荷的平均數量，是 ADC 的最關鍵質量屬性，直接影響其安全性和有效性，因此需要根據連接子和有效載荷的化學性質、偶聯方式以及 DAR 異質性高低選擇適宜的分析手段。安捷倫開發了針對半胱氨酸偶聯 ADC 藥物的 DAR 值測定的平臺化方案。以維泊妥珠單抗（DAR4）和德曲妥珠單抗（DAR8）為例，我們通過 HIC-HPLC、RP-HPLC 和 Native SEC-Q TOF 和 RP-Q TOF 的四個不同方法，從完整水平和亞基水平檢測 DAR 值，結果表明所測 DAR 值有非常高的一致性（圖 1 和圖 2）。
HIC-HPLC 檢測 DAR 值方法以新一代智能化
1260 Infinity III Bio inert LC 或 1290 Infinity III Bio UHPLC 為平臺，對超高鹽流動相有更好的耐受性。此方法由于使用不揮發高鹽流動相，不能直接進入質譜表征，而安捷倫 2D LC MS 技術平臺可在不改變一維流動相基礎上，二維實現在線除鹽后直接連接質譜進行表征，MS 定性后可直接計算 DAR 值。
RP-HPLC 方法是先將 ADC 進行還原，反相色譜分離 ADC 不同亞基后，VWD 信號計算 DAR 值，此方法可連接 MSD XT 定性還原后的不同輕重鏈片段，因此也可以根據 TIC 信號計算 ADC DAR 值。HPLC 方法平臺以 CDS2 軟件控制結合定制化 DAR 計算報告，自動完成 DAR 值計算，保證計算準確性的同時，提高數據處理效率，滿足研發和 QC 實驗室合規性要求。
以 Native SEC Q TOF 和還原 RP Q TOF 方法檢測 ADC DAR 的方法中，DAR 計算由安捷倫 Bioconfirm DAR calculator 軟件自動完成，軟件以解卷積后的質譜數據自動識別不同 DAR 值峰，將峰積分自動加權計算，即可自動完成 DAR 計算，這樣省卻了大量手動計算工作同時減少了誤差（圖 3）。應用安捷倫 LC Q TOF 平臺，RP Q TOF 可用于高通量 ADC DAR 值檢測，結果穩定。
圖 3. Native SEC Q TOF 圖譜及（德曲妥珠單抗）ADC Dar 值計算（上）；RP Q TOF 圖譜及（德曲妥珠單抗）ADC Dar 值計算（下），紅線框為 BioConfirm 軟件 DAR calculator 自動計算 DAR 值設置界面，軟件以解卷積后的質譜數據自動識別不同 DAR 值峰，將峰積分自動加權計算，即可自動完成 DAR 計算
安捷倫開發的基于 
HPLC 和 LC QTOF平臺檢測 ADC DAR 的四個方法，可應用于 ADC 藥物篩選、工藝開發、質量研究和 QC 放行的整個 ADC 藥物研發周期。
即將發布的《人用抗體偶聯藥物制品總論》以及 2024 年發布的《抗體偶聯藥物藥學研究與評價技術指導原則》為 ADC 藥物的研究和分析提供了重要指導作用。持續關注安捷倫，我們將不斷推出 ADC 藥學研究和生物分析方面的解決方案，和您一起探索 ADC 分析中的問題和挑戰。
如希望了解更多安捷倫 ADC 分析表征解決方案，請掃碼下方二維碼獲取：
1. 生物制藥工作流程解決方案加速 ADC DAR 表征
2. 使用 UHPLC/Q-TOF 聯用系統測定抗體藥物 偶聯物 (ADC) 的藥物/抗體比率 (DAR)。
3. 分析抗體-藥物偶聯物的藥物結合位點利用自動化樣品前處理與 LC/MS 分析
4. 利用正交分析方法提高抗體藥物偶聯 物的質量
5. 測定血清純化所得的抗體藥物偶聯物的藥物/抗體比率
