多肽藥物的發展由來已久，也是目前新藥研發領域備受矚目的熱門方向，包含合成多肽和重組多肽產品。大多數多肽藥物通過固相多肽合成法進行生產。化學合成多肽相關雜質可能來自原輔料、生產過程，或者在生產或儲存過程中因降解而產生。

隨著多肽藥物研究技術的提高和相關法規的完善，藥審中心于今年 2 月發布了《化學合成多肽藥物藥學研究技術指導原則（試行）》^[1]，提出化學合成多肽藥物藥學研究的一般性技術要求。尤其在指導原則中制定了肽相關雜質的報告限、鑒定限和質控限，使得多肽有關物質的分離得到了更高的關注。肽相關雜質由于與目標分子結構相關，因此在日常方法開發過程中通常有著極大的挑戰。

增強型方法提供了一套系統的方法來開發和完善分析方法，開發流程會考慮多個變量（因素）之間的相互影響。通過增強型方法可以建立穩定耐用的多肽雜質分析方法（ICH Q14，Enhanced Approach）^[2]。利用 Agilent 方法開發系統，有助于進行多肽有關物質分析的多因素多變量分析方法開發。

在方法篩選時，首先利用色譜柱選擇性和流動相選擇性差異，組合進行方法初篩，確定初步方法。針對多肽：建議初始有機相流動相為乙腈，流動相 B 必要時從乙腈換成甲醇或乙腈甲醇混合；三氟乙酸（TFA）因為可以抑制色譜柱固定相硅膠表面的硅醇基，改善分離，所以 0.1% TFA 水溶液作為水相流動相而常見。隨著色譜柱封端技術的成熟，流動相 A 必要時也可考慮緩沖鹽體系，同時對鹽類型和濃度進行進一步優化。初始方法確定后，再對溫度和梯度的進行組合優化，必要時再進行 pH 的精細篩選。

從上述方法開發工作流程可以看出，色譜柱選擇性會極大程度影響到初步方法的確定。因此一個合適的色譜柱組合可幫助簡化方法開發。我們列出了日常安捷倫工程師在實驗方法開發過程中所涉及的色譜柱組合。這些精心挑選過的色譜柱，可以支持多肽客戶在日常大部分有關物質方法開發中的工作。安捷倫色譜柱按照行業嚴格的質量控制規范制造而成，具有可重現的可靠性能。