細胞計數儀的用途以及細胞培養需要注意的外在因素
細胞計數是細胞培養研究中的一項基本研究,它是了解培養細胞生長狀態,測定培養基、血清和藥物等物質生物作用的重要手段。自動細胞計數器能夠在1min以內對培養的細胞分析,并獲得細胞活細胞和死細胞濃度、細胞平均體積大小、生存能力、細胞大小或體積分布曲線圖。自動細胞計數器還有用于藻類,微生物等直徑細胞計數器范圍內的生物。相對血球計數板法,細胞計數儀計數更加精確,快速便捷,誤差更小。
二:儀器在實驗中的應用:
測定不同時間段的培養液中細胞的濃度,繪制細胞的生長曲線,確定細胞的倍增時間。這是細胞培養過程中必要的一項研究。細胞的生長包括滯留期,指數生長期(對數期),平臺期(生長停止期)如下圖。不同的生長時期細胞內的代謝途徑是不同的。
細胞生長曲線示意圖
三:細胞計數。在測定胞內外代謝物的時,可以知道每個細胞的胞內外代謝物的情況,避免了在平行實驗或者是對照實驗中由于細胞數量不同而造成的誤差。
四:細胞存活率。細胞的存活率可以用于細胞毒性實驗,藥物處理實驗,細胞凋亡實驗等實驗中。
五:獲得細胞體積直方圖可以得到用來區別細胞的形態。
那么細胞培養時防止收到外界影響需要注意什么?
1.無菌環境
無毒和無菌是體外培養細胞的首要條件。細胞在活體內,解毒系統和免疫系統可抵抗微生物或其他有害物質的入侵,但細胞在體外培養的過程中,缺乏機體免疫系統的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質的解毒能力。為保證細胞能在體外環境中生長繁殖,必須要確保無菌工作區域、良好的個人衛生、無菌試劑和培養基以及無菌操作。
2.合適的溫度
一般哺乳類與禽類細胞在體外培養的適宜溫度是37~38℃,不適宜的環境溫度會影響細胞的生長。細胞對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力,在低溫下,細胞的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃,雖然細胞代謝受到影響,但無損傷作用;25~35℃時,細胞以緩慢的速度生長;但若被置于40℃數小時,則不僅不利于細胞生存、生長,甚至可導致其死亡。
3.適宜的滲透壓
高滲溶液或低滲溶液會引起細胞發生褶皺、腫脹、破裂。因此,滲透壓是體外培養細胞的重要條件之一。多數體外培養的細胞對滲透壓都有一定的耐受能力,實際應用中,260~320mmol/L的滲透壓可適用于大多數細胞。
4.氣體環境與pH
細胞的體外培養需要理想的氣體環境,氧氣、二氧化碳是細胞生存的必要條件。氧氣參與細胞的三羧酸循環,為細胞生存、代謝與合成提供能量;二氧化碳既是細胞的代謝產物,是細胞生長的必需成分,又與維持培養液的pH有關。大多數細胞適宜的pH范圍往往是7.2~7.4。在開放式培養中,以5%的二氧化碳氣體比例為宜。