5
單細胞分離提取系統整合了熒光激活細胞分選技術
單細胞分離提取系統主要基于多種物理、化學或生物學原理來實現對單個細胞的準確分離。
微流控技術是單細胞分離提取中的核心技術之一。它通過在微觀尺度上操控流體，構建復雜的微通道網絡。細胞懸液在壓力驅動或電場力作用下進入這些微通道，由于通道尺寸與細胞大小相匹配，單個細胞被限制在特定通道內流動。同時，利用不同的分流結構、閥控系統，可以根據細胞的特性(如大小、表面標記等)將目標細胞引導至特定的收集區域，從而實現單細胞水平的分選。例如，在一些基于微流控的單細胞分離設備中，通過設置不同寬度的通道分支，較小的細胞會進入較窄分支，而較大的細胞則被導向較寬分支，借此實現按細胞大小分類的初步分離。
部分單細胞分離提取系統整合了熒光激活細胞分選技術。細胞被特異性熒光染料標記，這些染料能夠與細胞表面的特定抗原或細胞內的特定成分相結合。當細胞逐個通過激光束時，熒光標記的細胞會發射出特定波長的熒光信號。系統通過檢測這些熒光信號，結合細胞的其他散射光特性(反映細胞大小、顆粒度等)，依據預設的分選標準，利用電荷耦合裝置產生的電場力將目標單細胞從細胞群中準確分離出來，并收集到對應的容器中。比如在研究特定癌細胞時，可利用針對癌細胞表面標志物的熒光抗體進行標記，然后通過 FACS 技術準確挑出帶有該標志物的單細胞用于后續分析。
免疫磁珠分選也是常見手段。將具有特異性抗體的磁珠與細胞懸液混合，抗體與目標細胞表面的抗原特異性結合，形成磁珠 -細胞復合物。隨后，將細胞懸液置于磁場中，帶有磁珠的 target 細胞會被磁場吸引，而未結合磁珠的細胞則留在原處，由此實現單細胞的分離。這種方法在分離具有特定表面抗原表達的稀有細胞方面頗具優勢，像從外周血中分離循環腫瘤細胞時就經常運用，通過針對腫瘤細胞特有抗原的磁珠高效捕獲目標單細胞。
單細胞分離提取系統的使用注意事項：
1.無菌操作：整個實驗過程需嚴格遵循無菌操作原則，使用無菌的設備、試劑和耗材，防止微生物污染影響細胞的活性和實驗結果。
2.細胞活力保持：盡量縮短細胞分離和處理的時間，減少對細胞的刺激和損傷，以維持細胞的活力和正常生理狀態，確保實驗結果的準確性。
3.緩沖液選擇：注意選擇合適的緩沖液用于細胞的分選、收集和處理，以保證細胞的穩定性和實驗的順利進行。
4.設備校準與維護：定期對單細胞分離提取系統及相關設備進行校準和維護，確保其性能穩定和準確，避免因設備故障導致實驗誤差。
5.樣本質量控制：在實驗前對樣本的質量進行評估，確保樣本符合實驗要求，如細胞數量、純度、活性等，同時注意樣本的保存和處理方法，防止樣本變質或降解。
6.數據分析準確性：在數據分析過程中，要選擇合適的分析方法和工具，并對數據進行嚴格的質量控制和驗證，以確保分析結果的可靠性和有效性。
