細胞庫的建立可為生物制品的生產提供檢定合格、質量相同、能持續穩定的細胞。細胞庫是生物制藥的源頭，是重中之重，對于生產或檢定用細胞庫，各國監管機構一般要求三級管理，即原始細胞庫（PCB）、主細胞庫（MCB）和工作細胞庫（WCB）。PCB負責提供種子細胞，經過不斷的克隆、篩選和鑒定后，形成MCB，再通過傳代擴增等過程，最終形成WCB，用于大規模的生物制品生產。如果穩定表達細胞株或者商業化的細胞株為引進和購買的，也可以采用MCB和WCB組成的二級細胞庫管理。當然，在某些特殊的情況下，也可以只選擇建立MCB一級細胞庫，但需經過監管機構批準，足見其對細胞質量和藥品安全的嚴格要求。PCB的數量是根據實際來計算的，每個品種可能都不一樣，需要考慮后續生產、檢定需要、保藏年限，檢測用數量、復檢頻率等，MCB和WCB凍存多少數量，根據需要確定，需保證后續生產、檢定足夠，即遵循“夠用原則"。

細胞庫建庫流程

干細胞療法已被證明是一種很有前途的創新療法，其中，間充質干細胞（MSC）憑借低免疫原性、高增殖潛力以及免疫調節等特性被廣泛應用研究。根據文獻統計，截至2023年，全球已有一千多項注冊臨床試驗使用MSC療法，12種MSC療法獲得監管機構批準商業化。未來，間充質干細胞將在更多疾病的治療中發揮重要作用。然而，MSC細胞的凍存卻非易事，成功建立可靠的MSC細胞庫往往需要處理好各種操作細節，此外，MSC在超低溫環境下，代謝活性和黏附能力出現降低，細胞膜和細胞骨架發生變化。更為常見的是，MSC 經過超低溫凍存，基本上都存在細胞活率下降問題，這對臨床治療效果有一定影響。

MSC作為種子細胞或者工作細胞，細胞凍存是繞不開的步驟。如ICH Q5D所述，防止外源因子污染，保證細胞在各個凍存管中均勻分布，保證復蘇細胞具有恒定而符合生產要求的活力，是細胞庫制備的三個基本要求。而目前國內大部分生物制藥企業還是采用手動的方式來進行細胞灌裝，其存在細胞樣品與凍存液接觸時間長導致細胞狀態變差使得細胞庫質量差、大量的人工重復操作帶來的誤差以及染菌風險等問題，為了節省建庫的時間、提高細胞的一致性、降低污染風險、節省質量控制的成本，需要一種可靠有效的細胞灌裝方法，本篇將為大家重點介紹高通量自動化灌裝MSC細胞的解決方案—艾貝泰AbioFill V100細胞灌裝系統。

MSC細胞灌裝實驗內容

1.實驗材料：

細胞：貼壁的間充質干細胞（MSC）凍存液：90%FBS+10%DMSO凍存管：Corning 430659（2ml,Ex）AO/PI染色液程序凍存盒等

2.儀器設備：

灌裝系統：AbioFill V100細胞灌裝系統細胞質量監控：Countleader細胞計數儀FL1000

3.實驗參數：

灌注模式：開蓋-灌注-封蓋灌注流速：350μL/s灌注體積：1000μL  

4.細胞灌裝視頻

5.討論：MSC細胞上機前用30mL凍存液重懸（50mL離心管體系），灌裝前細胞留樣進行細胞計數，測得細胞活率為97.55%，細胞密度約1.15E6cells/mL。使用灌裝系統進行24支凍存管灌注，灌裝體積為1mL/管，灌裝后取樣對24支凍存管的細胞進行細胞計數，并使用程序降溫盒在-80℃凍存此24支細胞。凍存24h后，37℃水浴復蘇，進行細胞計數。

灌注前/后、復蘇后平均活率（左）與平均活細胞密度（右）柱狀圖（n=24）

灌注前/后、復蘇后平均活率與活細胞密度表（n=24）

經統計分析，發現灌注前、后細胞活率與細胞濃度差異不大，復蘇后的細胞活率稍微有所下降，下降幅度約為3%，為可接受范圍。活率下降可能因為灌裝后取樣計數過程使細胞在常溫凍存液內時間過長導致，縮短操作時間可以有效避免此活率下降。

以上實驗證實，AbioFill V100全自動細胞灌裝系統能自動化、高效地灌裝MSC細胞，灌裝前后細胞質量不受到影響，可以建立高質量、均一性的MSC細胞庫，解決MSC細胞大規模凍存的工業化問題，促進細胞治療行業的良好發展。

AbioFill V100灌裝系統

FL1000細胞計數儀