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廣州市艾貝泰生物科技有限公司

淺析基因電轉染儀脈沖過程

時間:2022-5-27 閱讀:619
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  基因電轉染儀作為物理方法的一種,不僅能將DNA、RNA,還能將抗體、酶及其他生物活性分子轉入細菌、酵母、動物細胞和植物細胞。它是一種簡便的基因轉移系統,具有其他轉移方法不能對比的*性,如操作簡便、快捷,可重復性強,轉染率高,適用廣譜等,尤其對目前一般認為難轉的懸浮培養細胞也能獲得較高的轉染。
 
  電穿孔法是通過電場作用于細胞幾微秒到幾毫秒之后,在細胞膜上暫時形成小孔或開口,把大分子如DNA等導入細胞并進入細胞核的技術。其過程簡述如下:首先在電擊過程中,細胞膜上出現穿孔,質粒在電泳力的作用下與細胞膜接觸,并在細胞膜上電穿孔的區域形成一種可轉移的復合物。再次電擊后,質粒脫離復合物并擴散至細胞質內,開始瞬轉;同時小部分質粒進入核內與染色體整合,開始穩轉。一旦DNA擴散至細胞,膜上小孔會關閉。
 
  淺析基因電轉染儀脈沖過程:
  1)脈沖波形
  脈沖波形主要分為兩種:1、方波脈沖;2、指數遞減波脈沖。方波脈沖是指:電壓瞬間升至預設電壓,保持電壓放電,然后瞬間終止放電。一般哺乳動物細胞電轉染時選擇方波脈沖,有較高的轉染效率和細胞存活率。指數遞減波脈沖是指:先對電容充電,然后讓電容*放電,其電壓變化呈指數遞減。一般這種波形的脈沖電轉染適用于細菌、酵母菌、昆蟲細胞。
  2)脈沖時間
  脈沖時間的選定主要取決與脈沖波形。在方波脈沖中,脈沖時間可直接設定。在指數遞減波脈沖中,脈沖時間是指電壓衰減至初始電壓1/3時所用的時間,等于電容(C)與電阻(R)的乘積,單位是ms。在參數優化中,增加電壓應當降低脈沖時間,而減小電壓則應當增大脈沖時間。

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