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臺州賽瑞崔克生物技術有限公司
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Celetrix細胞電轉(zhuǎn)方案說明

時間:2024/5/20閱讀:267
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Celetrix電轉(zhuǎn)幾乎不挑細胞種類,都可以達到高效率。有一部分細胞種類,由于其本身具有的性質(zhì),在電轉(zhuǎn)時需要特別注意采用合適的方案。
 
單核細胞和巨噬細胞相關的細胞系,有些電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后細胞會在兩三天內(nèi)幾乎全部死亡。THP-1,U937,HL-60和Molm13等細胞電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后會死亡。其他老式的電轉(zhuǎn)儀電轉(zhuǎn)質(zhì)粒到這些細胞后會有部分細胞存活,是因為其中有很多沒有電轉(zhuǎn)成功的細胞活下來了,對于電轉(zhuǎn)沒有什么意義。
 
Celetrix專門開發(fā)了試劑盒可以幫助單核細胞類的細胞系進行質(zhì)粒電轉(zhuǎn),目前驗證過THP-1和U937細胞轉(zhuǎn)入質(zhì)粒后部分細胞可以存活生長,從而使難做的細胞株穩(wěn)轉(zhuǎn)變得很簡單。下圖所示THP-1細胞電轉(zhuǎn)Cas9-gRNA-Puro-GFP質(zhì)粒時僅用1x10E6細胞就可以篩選得到穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆并且成功進行基因編輯。

 

THP-1這些細胞電轉(zhuǎn)mRNA, siRNA和 Cas9 RNP沒有細胞死亡的問題。如果可以不使用質(zhì)粒,電轉(zhuǎn)非常容易,效率接近100%并且細胞存活非常好。
 
我們的THP-1試劑盒對于Molm13和SUP-M2細胞的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)幫助不大,我們在繼續(xù)研究其質(zhì)粒電轉(zhuǎn)方法。
 
小鼠的原代骨髓分離的單核細胞和造血干細胞非常特殊,不僅電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后容易死亡,也會迅速降解mRNA和siRNA造成電轉(zhuǎn)不成功的假象。只要電轉(zhuǎn)液和mRNA和這些細胞接觸1分鐘,再轉(zhuǎn)移到其他細胞上電轉(zhuǎn)就會發(fā)現(xiàn)mRNA已經(jīng)完全降解。小鼠脾臟細胞也有降解mRNA和siRNA的特性。而小鼠腹腔的巨噬細胞雖然電轉(zhuǎn)質(zhì)粒后容易死亡,電轉(zhuǎn)mRNA卻沒有降解問題可以使實驗順利進行。
 
電轉(zhuǎn)實驗中碰到特殊現(xiàn)象時,用戶可以發(fā)郵件向我們咨詢,我們可以提供其他實驗方案供選擇。

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