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Starvio siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)指南--細(xì)胞狀態(tài)2023/8/24
RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的影響因素有很多，而細(xì)胞狀態(tài)往往是同學(xué)們最容易忽略的一點(diǎn)。如果細(xì)胞狀態(tài)差，那么轉(zhuǎn)染時就會出現(xiàn)細(xì)胞死亡、轉(zhuǎn)染效率低下等結(jié)果。那么關(guān)于細(xì)胞狀態(tài)，我們應(yīng)該注意些什么呢？一、使用凍存復(fù)蘇后，已傳...
淺議RNAi與siRNA轉(zhuǎn)染試劑的應(yīng)用2023/8/23
RNAi（RNAinterference，RNA干擾）是近年來生命科學(xué)領(lǐng)域最為重大的發(fā)現(xiàn)之一。它是指小分子雙鏈RNA可以特異性地降解同源mRNA,從而抑制或關(guān)閉特定基因表達(dá)的現(xiàn)象。人們只要知道了某種疾...
如何進(jìn)行活體組織mRNA轉(zhuǎn)染2023/8/10
StarviomRNA活體組織轉(zhuǎn)染試劑專門用于活體動物組織和臟器的mRNA介入轉(zhuǎn)染，目標(biāo)轉(zhuǎn)染臟器可以是肝臟、肺臟、乳腺等臟器，也可以是轉(zhuǎn)移瘤、種植瘤、肌肉、骨髓等組織。StarviomRNA使用簡便，...
怎樣選擇合適的血漿游離DNA提取試劑2023/8/9
1、什么是血漿游離DNA？血漿游離DNA，是指血液中游離于細(xì)胞外的DNA，其來源主要有三：白細(xì)胞崩解釋放的DNA、壞死組織特別是腫瘤組織釋放入血液的DNA和感染病毒、細(xì)菌的DNA。目前，游離DNA已作...
如何高效將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞2023/8/9
關(guān)于A549細(xì)胞1：細(xì)胞名稱:人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549細(xì)胞)2：形態(tài)特性:上皮樣，多角形3：生長特性:貼壁生長StarVio-A質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑1：轉(zhuǎn)染效率在貼壁細(xì)胞中可高達(dá)90%以上2：極低的...
siRNA轉(zhuǎn)染操作及要點(diǎn)2023/8/7
轉(zhuǎn)染試劑儲存轉(zhuǎn)染試劑-20°C避光保存，TransEnhancer于2-8°C存放體外轉(zhuǎn)染操作流程1：細(xì)胞接種:轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50%2：siRNA-Starvio轉(zhuǎn)染復(fù)...
如何高效將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染至293細(xì)胞系2023/8/7
關(guān)于293細(xì)胞系293細(xì)胞(人胚腎細(xì)胞)系包括AAV293、HEK293、293T293F、293A等細(xì)胞株，是進(jìn)行病毒包裝和重組蛋白表達(dá)最為常用的工程細(xì)胞之一。特別是AAV293細(xì)胞，目前已成為腺相...
如何提高 RT-PCR 反應(yīng)的靈敏度與特異性2023/6/30
1.首先確定模板RNA完整性好，無DNA污染。2.RNA模板中不應(yīng)含有擴(kuò)增反應(yīng)抑制劑。3.為了防止模板降解，在反應(yīng)體系中加入RNase抑制劑RNasin。4.使用適量的模板RNA，模板量太多會降低特異...
避免 RNA 降解的方法以及RNA 中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時的處理2023/6/30
避免RNA降解的方法：1.在用來驗(yàn)證完整性之前先在變性膠上分析RNA。2．使用良好無污染技術(shù)分離RNA。3.將組織從動物體取出后立刻提取RNA，并將提取好的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA進(jìn)行低溫保存。RNA中...
RT-PCR的靈敏度低2023/6/30
可能原因1：RNA問題（包括：RNA被損害和降解；初始模板RNA不充分）。解決方法：如果全損害或者降解的話，更換RNA；增加模板RNA的濃度；使用10ng-1μg的總RNA?？赡茉?：儀器故障。解決...
RT-PCR的非特異信號2023/6/30
可能原因1：引物問題（包括：引物二聚體太多）。解決方法：檢查引物設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)和合成環(huán)節(jié)，必要時重新設(shè)計(jì)和合成引物?？赡茉?：擴(kuò)增酶問題。解決辦法：選擇hotstartTaq酶進(jìn)行擴(kuò)增，可提高靈敏度，增加...
RT-PCR的無擴(kuò)增產(chǎn)物2023/6/30
可能原因1：引物問題（包括：引物設(shè)計(jì)較差，引物合成較差，引物濃度太低）。解決方法：設(shè)計(jì)引物的時候，避免在引物3'端含有互補(bǔ)序列；避免可以形成內(nèi)部發(fā)卡結(jié)構(gòu)的序列；設(shè)計(jì)Tm類似的引物。針對引物合成的問題，...
消滅 PCR 非特異性擴(kuò)增的方法2023/6/28
非特異性擴(kuò)增，即進(jìn)行PCR所擴(kuò)增出來的條帶不是所要的，引物與模板在非目的條帶處有錯配，導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體，即引物在退火過程中產(chǎn)生了hairpin結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu)，或者引物在模板...
DNA 復(fù)制需要哪些元素2023/6/28
1)需要脫氧核苷三磷酸：進(jìn)行DNA合成必須具備的2個關(guān)鍵底物之一，即4種脫氧核苷三磷酸——dGTP、dCTP、dATP、dTTP。通常商品化PCR酶會提供這4種脫氧核苷三磷酸的混合物dNTP。2)需要...
miRNA 成熟過程中的關(guān)鍵性酶和蛋白2023/6/27
RNApolymeraseII：一般認(rèn)為miRNA基因由RNApolymeraseII轉(zhuǎn)錄而來?？蓪iRNA基因轉(zhuǎn)錄成5'端蓋帽m7G和3‘端加尾polyA結(jié)構(gòu)。Drosha：Drosha蛋白為RN...
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