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PCR技術

時間:2025/5/12閱讀:38
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PCR(聚合酶鏈式反應)技術由美國生物化學家凱利·穆利斯于1983年發明,其核心原理是通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟的循環,利用DNA聚合酶特異性擴增目標DNA片段。


早期的PCR擴增受限于耐高溫酶的缺失,效率非常低,因此在科研實驗領域接受度并不高。

直至1986年,水生棲熱菌來源的Taq酶的應用,才實現PCR穩定、自動化的高效擴增。

PCR實驗技術一直以來不斷發展,例如基于普通PCR技術通過優化反應流程而衍生的巢式PCR、基于熱啟動酶提高擴增特異性的Hot start PCR、基于熒光檢測技術而發展qPCR、基于芯片微孔擴增實現更高精度分析的數字PCR等。
一般,正常的PCR反應過程會經歷3個核心階段:
1 高溫95℃解開DNA模板(熱變性)
2 降溫45-60℃使特異性引物與單鏈DNA互補結合(退火)
3 再次升溫至72℃,耐熱Taq DNA聚合酶沿模板從引物3'端開始合成互補鏈(延伸)
圖片



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