在做細(xì)胞基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)時(shí)，必要的一步就是需要探究清楚細(xì)胞的增殖變化和毒性耐藥變化情況，為下一步實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。

我們?cè)谧鯟CK-8增殖和毒性實(shí)驗(yàn)中常常會(huì)遇到一下幾個(gè)問(wèn)題：

1.細(xì)胞鋪板問(wèn)題 2.給CCK-8的方式問(wèn)題 3.CCK-8的反應(yīng)時(shí)間問(wèn)題

首先，在進(jìn)行細(xì)胞鋪板時(shí)， 需要用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，得到細(xì)胞數(shù)量后按照所需鋪板的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行調(diào)整。一般96孔板鋪板數(shù)量為1*10^6/孔。

制備細(xì)胞懸液時(shí)需要反復(fù)吹打，使細(xì)胞懸液充分混勻，降低出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊的幾率。一般96孔板，每孔加入100微升細(xì)胞懸液，從孔的9點(diǎn)鐘方向打入，加入半張板子時(shí)，需要再次將細(xì)胞吹勻，然后繼續(xù)加剩余的孔。

待全部加入完畢時(shí)，蓋上蓋子，放入培養(yǎng)箱。（細(xì)胞的均勻鋪被是本實(shí)驗(yàn)成功的大前提）。

其次，是細(xì)胞的處理。一般給CCK-8有兩種方式：第一種是直接每孔加入10微升的CCK8原液；另一種則是配置含10%的CCK-8培養(yǎng)基，以換液的形式加入孔板。

第一種方式的弊端在于10微升的CCK-8量比較少，可能因沾在孔壁導(dǎo)致誤差的出現(xiàn)。

第二種方式可以避免上述情況的發(fā)生，但操作過(guò)程中仍需注意10%的CCK-8培養(yǎng)基需要現(xiàn)配現(xiàn)用；其次打入100微升的CCK-8時(shí)沿著孔壁將槍頭伸入液體緩緩打出，再移出槍頭。

期間可能會(huì)產(chǎn)生小氣泡，需要用無(wú)菌針頭燒紅插入氣泡，消除氣泡。（氣泡會(huì)影響OD值，因此應(yīng)該盡量消除）。

最后，就是反應(yīng)時(shí)間問(wèn)題。將孔板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)1-4小時(shí)，引細(xì)胞種類和數(shù)量的差異，可能形成的Formazan的量不一樣。因此需要把握好培養(yǎng)的時(shí)間。

我的經(jīng)驗(yàn)是：在培養(yǎng)2h后，取出孔板，每孔抽取90微升加入至新孔板，進(jìn)行第一次檢測(cè)，看看顯色的深淺程度（仍然需要注意氣泡，若有氣泡需要待氣泡消除后再進(jìn)行檢測(cè)）

若顯色較淺，則可除去舊培養(yǎng)基，加入新培養(yǎng)基，再培養(yǎng)1-4小時(shí)，重新加CCK-8步驟，然后將其放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)4小時(shí)，再進(jìn)行檢測(cè)（其最佳反應(yīng)時(shí)間為0.5、1、2小時(shí)）

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動(dòng)生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營(yíng)管理水平和完善的市場(chǎng)銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國(guó)。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開(kāi)發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們?cè)谌珖?guó)主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國(guó)內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供服務(wù)。