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BV2細胞異常生長形態(tài)解析及解決方案

時間:2022/1/6閱讀:5068
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BV2

常用的小膠質(zhì)細胞模型,它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒(J2)感染原代小膠質(zhì)細胞而獲得永生化。BV2細胞表達非特異性酯酶活性,它具有吞噬性能力,并缺乏過氧化物酶活性。這種細胞不僅會分泌溶菌酶,在適當(dāng)?shù)拇碳は拢€會分泌白細胞介素1和腫瘤壞死因子。


此外,BV2細胞還表現(xiàn)出自發(fā)的抗念珠菌活性,用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。



從表型上看,BV2細胞對MAC1和MAC2抗原呈陽性,而對MAC3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)和半乳糖核苷(GC)抗原呈陰性[1]。

圖片

圖A. BV2細胞顯微照片,bar=30 μm.

圖B. 通過掃描電鏡觀察,在玻璃蓋板上培養(yǎng)的BV2細胞,bar=5 μm.

圖C. 通過透射電鏡觀察,BV2細胞的部分細胞質(zhì)吞噬iCA,bar=3 μm.

(圖片引用自文獻[1]


在培養(yǎng)BV2細胞的時候,同學(xué)們最常遇到的問題就是生長形態(tài)異常。生長形態(tài)異常往往伴隨著細胞生長緩慢、細胞死亡等,導(dǎo)致實驗做不出結(jié)果,給大家?guī)碇刂乩_。


小普根據(jù)多年的實驗經(jīng)驗,為大家整理了這一現(xiàn)象可能發(fā)生的原因,及相應(yīng)解決方案。


首先我們來看看正常的BV2形態(tài)。結(jié)合眾多文獻和Procell的細胞圖片來看,BV2是一種半貼壁半懸浮細胞,它的形態(tài)并不規(guī)則,存在圓形和梭形兩種。


懸浮細胞為圓形,貼壁細胞既有圓形也有梭形。由于圓形細胞折光率高,它的邊緣看起來是發(fā)亮的;梭形細胞則向兩端伸出黑色突起。

圖片

(圖片源自Procell)


那么,異常生長的BV2細胞有哪些形態(tài)呢?


如何根據(jù)不同的異常生長形態(tài),調(diào)整改善培養(yǎng)條件,及時解決問題?


小普總結(jié)如下:


圖片

形態(tài)1:細胞全部飄起,*不貼壁

解析:分為培養(yǎng)基偏堿及復(fù)蘇后不貼壁兩種情況。

(1)培養(yǎng)基偏堿培養(yǎng)瓶不透氣或者開封時間過長,培養(yǎng)基PH將增大,可見培養(yǎng)基呈紫紅色。BV2對培養(yǎng)基酸堿度較為敏感,在偏堿培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)小時后將會全部飄起。

解決方案:給細胞上新鮮配制的培養(yǎng)基,并使用透氣瓶。

(2)復(fù)蘇后不貼壁。需要檢查凍存或復(fù)蘇操作過程,以及培養(yǎng)基是否存在問題。

解決方案:確保凍存前狀態(tài)良好及凍存復(fù)蘇操作規(guī)范,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,即可解決問題。


圖片

形態(tài)2:細胞形態(tài)變?yōu)榘⒚装蜆?/strong>

解析:小膠質(zhì)細胞是一種可塑性*的細胞,可通過特定因素激活,從而發(fā)揮其免疫功能。從靜息態(tài)變?yōu)榧せ顟B(tài)的過程中,小膠質(zhì)細胞形態(tài)也隨之發(fā)生改變。


實驗中常用細菌脂多糖(LPS)和干擾素-γ(IFNγ),分別模擬細菌和病毒感染,來刺激小膠質(zhì)細胞激活。受到刺激的小膠質(zhì)細胞突起縮短變厚,胞體增大,呈現(xiàn)阿米巴樣(如下圖所示)。


但有的時候BV2形態(tài)變化并不明顯,還需要結(jié)合其他實驗,如檢測NO、IL-13等炎癥因子的表達,來確定BV2是否被定向激活。

圖片

(圖片引用自文獻[2]


如果細胞沒有受到任何刺激,就已經(jīng)呈現(xiàn)阿米巴樣,或者受刺激后,炎癥因子表達沒有差異,那么細胞有可能發(fā)生了自分化。


其原因可以從以下幾點考慮:

(1)存在潛在微生物污染,刺激細胞自分化。

解決方案:通過去掉培養(yǎng)基中的抗生素確定污染類型,并排查污染源頭。

(2)使用的胎牛血清內(nèi)毒素高,內(nèi)毒素刺激細胞自分化。

解決方案:嘗試使用超低內(nèi)毒素胎牛血清,或許能得到改善。


圖片

形態(tài)3:全都是分枝狀細胞,圓形細胞少

解析:這種形態(tài)往往伴隨著細胞生長慢或生長停滯的情況。由于圓形細胞增殖速度較快,在圓形細胞缺失的狀況下,整體增殖速度就會減慢。

解決方案:由于BV2是一種半貼壁半懸浮細胞,貼壁和懸浮細胞的比例并不固定,當(dāng)懸浮細胞較多時,換液和傳代時要將懸浮細胞收集,避免圓形細胞的大量損失。


總而言之,BV2細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)與其生長環(huán)境息息相關(guān),給細胞以最合適的環(huán)境,嚴格按照要求規(guī)范操作,細胞也將用好的狀態(tài)回報你。


參考文獻:

[1] PubMed=2110186; DOI=10.1016/0165-5728(90)90073-V.

Blasi E., Barluzzi R., Bocchini V., Mazzolla R., Bistoni F.

Immortalization of murine microglial cells by a v-raf/v-myc carrying retrovirus.

J. Neuroimmunol. 27:229-237(1990)

[2] PMID=31590042 ; DOI=10.1016/j.molimm.2019.09.020.

Zhang J, Zheng Y, Luo Y, Du Y, Zhang X, Fu J.

Curcumin inhibits LPS-induced neuroinflammation by promoting microglial M2 polarization via TREM2/ TLR4/ NF-κB pathways in BV2 cells. 



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