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哺乳動物中制備基因組 DNA 實驗

時間:2021/12/14閱讀:1195
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材料與儀器

動物組織
PBS 乙酸銨 乙醇 酚 氯仿 異戊醇 TE
離心機 搖床 研缽

步驟


1.  切下組織并立即剪成小塊,置于液氮中凍結。
 
2.  將200 mg~1 g 的組織用預冷的研缽和研杵研碎,或用錘子將其搗為細粉末,每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。
 
3.  500 g 離心細胞5 min,棄上請。貼壁生長細胞先用胰酶消化。

4.  細胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸,500 g 離心5 min,棄上清,重復1次。

5.  用1體積 的消化緩沖液重懸細胞。
 
6.  將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。
 
7.  用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品,1 700 g 離心10 min。

8.  如果樣品溶解得不好, 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液,并重復離心。

9  如果在界面上有一層厚的白色物質,重復有機抽提,將上層(水溶液)轉移至一個新管中。
 
10.  加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉,1 700 g 離心2 min。
 
11.  用70%乙酵洗滌,晾干,沉淀用TE。

12.  緩沖液重新溶解,使終濃度在約1 mg/ml 左右。


注意事項

1.  如果是用肝組織,要除去膽囊,因其含有高水平的各種消化酶。

以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎關注安培生物科技有限公司了解更多技術與產品資訊。


安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務,努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。


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