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緩沖液
磁性細胞分離器 分離柱適配器 陽性選擇柱 符合收集容積的收集器 磁性微珠
一、標記
1. 標準方法分離外周血單核細胞或經酶消化法及其他方法制備的細胞懸液。
2. 用 Ficoll-Paque 去除死細胞。
3. 用 30 μm 尼龍網篩或濾膜（Myltenyi，# 414: 07）過濾細胞去除細胞團塊 （濾膜應用前用緩沖液濕潤）。
4. 緩沖液（D-PBS，pH 7.2 ，含 0.5 % BSA 和 2 mmol/L EDTA）洗滌細胞，離心。
5. 重新懸浮離心細胞，每 107 個細胞懸浮于 80 μl 緩沖液（80 μl 為最少*，即使總細胞數低于 107 個）。
6. 按每 107 個細胞加微珠標記液 20 μl。
7. 混勻，6~12℃ 孵育 15 min (對于更少的細胞，用同樣體積的微珠標記液）。
8. 加入 10~20 倍于標記液體積的緩沖液稀釋細胞。
9. 300 g 離心 10 min。
10. 去上清，按每 108 個細胞加緩沖液 500 μl 重新懸浮結合了微珠的細胞。
二、陽性磁性分離
11. 將分離柱放入 MACS 分離器（MiniMACS、MidiMACS、VarioMMMACS，或 SuperMACS（Miltenyi））的磁性區。
12. 洗柱：MS＋/ RS＋ 500 μl； LS＋/ VS＋ 3 ml。
13. 將細胞懸液加人分離柱中：MS＋/ RS＋ 500~1000 μl； LS＋/ VS＋ 1~10 ml。
14. 讓陰性細胞流過分離柱。
15. 用緩沖液淋洗柱子： MS＋/ RS＋ 3×500 μl； LS＋/ VS＋ 3×3 ml。
16. 將分離柱從分離器中取出放置在收集管上。
17. 用吸管加適量緩沖液于柱中（MS＋/ RS＋ 1 ml； LS＋/ VS＋ 5 ml），推動針管式活塞洗脫陽性標記細胞。
18. 細胞計數，用生長培養基調整濃度。
(a)原代培養調整為1×105~1×106 /ml，接種于培養瓶中；
(b)克隆培養調整為 10~1000 /ml，接種于培養皿。
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