實驗步驟
1. 靶細胞的標記
用5μmol/L Calcein AM 37℃ 水浴30min進行標記。
2. 效-靶細胞作用
殺傷實驗在圓底96孔培養板中進行。按E/T比例:50/1、25/1、12.5/1、6.25/1、3.13/1、1.56/1加入梯度稀釋的效應細胞與標記好的靶細胞各l00μl/孔,每個比例3復孔。同時設自發釋放組3復孔,*釋放組3復孔。效-靶細胞作用96孔培養板在37℃ 5% CO2培養箱孵育4h后,3000r/min離心5min,將上清移入新的孔中。
3. 熒光檢測
用熒光測量儀檢測上清的熒光值(FI),激發光為485nm,發射光為538nm。
4. 結果計算
殺傷率(%)=■×100%