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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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血清系列
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
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細(xì)胞凍存
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高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞的操作方法

時(shí)間:2021/11/11閱讀:2012
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高效轉(zhuǎn)染質(zhì)粒大小10646bp、HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞的操作方法

轉(zhuǎn)染條件

細(xì)胞密度:60左右

質(zhì)粒DNA濃度:648ng/ul

質(zhì)粒DNA大?。?0646bp

培養(yǎng)板:6孔板

轉(zhuǎn)染試劑用量:8ul

質(zhì)粒DNA用量:電訊

轉(zhuǎn)染試劑:AD600150,Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間:48小時(shí)

血清:Z7010FBS-500澳洲胎牛血清

細(xì)胞凍存:CE70100T無血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞活力檢測:K009-500,CCK8


操作方法

提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達(dá)。


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