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深圳市安培生物科技有限公司

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當(dāng)前位置：深圳市安培生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>初代細(xì)胞培養(yǎng)——消化培養(yǎng)法

產(chǎn)品分類品牌分類

血清系列: SERANA胎牛血清低內(nèi)毒素膠原蛋白 ZETA LIFE胎牛血清

細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 活體轉(zhuǎn)染試劑 LIPO3000轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染試劑

支原體清除: 支原體去除試劑

細(xì)胞凍存: 無血清細(xì)胞凍存液

實驗耗材: 多功能開關(guān)器封板膜 PCR & qPCR 孔板 qPCR耗材 PCR耗材

分子試劑: RNA提取等溫擴增克隆突變 PCR系列核酸提取純化核酸染料

細(xì)胞增殖與凋亡: 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒細(xì)胞增殖及毒性檢測

Biozellen系列: 鼠尾膠原蛋白 3D基質(zhì)膠

培養(yǎng)基: 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基細(xì)胞添加劑無血清培養(yǎng)基

ELISA試劑盒: 豬ELISA試劑盒小鼠ELISA試劑盒

TOYOBO（東洋紡）: PCR相關(guān)試劑

ZYMO RESEARCH: 試劑盒

Greiner（格瑞納）: 細(xì)胞培養(yǎng)小室

IKA（艾卡）: 刀頭

化學(xué)發(fā)光底物（ECL）: ECL化學(xué)發(fā)光液

PROSPEC系列: 單胺氧化酶

Epigentek系列: 細(xì)胞分析試劑盒

微生物檢測: 生化鑒定試劑盒

細(xì)胞生物學(xué): 細(xì)胞輔助試劑細(xì)胞檢測試劑

Corning康寧: 凍存管嵌套/小室

解離試劑: 胰蛋白酶

細(xì)胞類-實驗耗材: 細(xì)胞培養(yǎng)瓶細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞培養(yǎng)板

原代細(xì)胞: 小鼠原代細(xì)胞

植物檢測系列試劑盒: 植物激素系列植物氧化與抗氧化系列植物氮代謝系列植物脂肪酸代謝系列植物固氮作用系列植物呼吸作用系列植物光合作用檢測試劑盒

SERANA: BSA

細(xì)胞系: 人源細(xì)胞系

生化試劑盒

環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）: 土壤氧化還原酶系列

類器官培養(yǎng): 培養(yǎng)試劑盒

緩沖器和解決方案: 抗生素培養(yǎng)添加物隱窩增強劑保護(hù)液洗滌液凍存液解離液

生物三凝膠基質(zhì): 細(xì)胞外基質(zhì)

細(xì)胞因子分子: 抑制劑激動劑

生物樣本庫: 類器官

蛋白研究系列: 蛋白緩沖 ALP發(fā)光液 ECL系列轉(zhuǎn)印膜轉(zhuǎn)膜封閉 PAGE凝膠試劑盒蛋白電泳蛋白制備免疫檢測

修飾檢測試劑盒: 蛋白修飾檢測試劑盒

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初代細(xì)胞培養(yǎng)——消化培養(yǎng)法

時間：2021/11/8閱讀：1809

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材料與儀器

組織
Hanks 培養(yǎng)液胰蛋白酶
吸管平皿培養(yǎng)瓶燒杯攪拌器三角燒瓶不銹鋼篩眼科剪眼科鑷計數(shù)板

實驗步驟

1. 準(zhǔn)備

取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20 分鐘；

2. 布局

點燃酒精燈（或煤氣燈），安裝吸管帽（應(yīng)通過火焰）；

3. 處理組織

把組織塊置入燒杯中，用Hanks液漂洗2~3 次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60 分鐘；

4. 剪切

用眼科剪把組織塊切成2~3 毫米大小的塊（用手術(shù)刀割亦可），以便于消化；加入比組織塊總量多30~50 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞；

5. 消化

或用恒溫水浴，或置入37 ℃溫箱消化均可，消化中每隔20 分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好（消化前瓶中需置一無菌攪棒）；消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定；

6. 分離

在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊（必要時可繼續(xù)進(jìn)行消化）；低速（500~1000 轉(zhuǎn)/分）離心消化液5 分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液（如有其它酶或EDTA 等消化，需用Hanks液洗脫一兩次后，再加入培養(yǎng)液）；

7. 計數(shù)

用計數(shù)板計數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中；對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH 要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說膽液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整；

8. 培養(yǎng)

置入36.5 ℃溫箱培養(yǎng)；如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽（松口）堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需更換新塞。

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