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WB電泳技巧分享

時間:2021/9/14閱讀:5712
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① 清洗玻璃板,去離子水沖,風干或烤干(一定要以處女座的精神去嚴格要求自己把板子洗干凈,相當重要) 

② 按說明書配膠。先配下膠(分離膠),一般兩塊板配 10ml 的 10%的膠(20~80kDa 通用)膠的濃度根據你所需要跑的蛋白的分子量大小決定,混勻后灌膠,立即用正丁醇或無水乙醇封,待凝固后倒出正丁醇,用去離子水沖洗,濾紙吸干;③ 配上膠(積層膠),參考說明書,一般兩塊板配 4ml 的 5%的膠,混勻后灌膠,插板,待凝固。(可 4°過夜) 

④ 配電泳液(tris3.03g,甘氨酸 14.4g,SDS1g,定容至 1L) 

⑤ 將玻璃板裝好放入電泳槽中,加電泳液,輕輕拔梳。 

⑥ 上樣(這是每個WB達人最能裝逼的一個環節,高手會告訴你憑感覺加樣連孔都不用看) 

⑦ 連接電源,一定要注意紅對紅,黑對黑,定電壓和時間,上膠(90v,約 40min,maker 分出條帶),換壓,下膠(120v,2h)。(不要讓溴酚藍跑出去)


經驗總結:

想要條帶跑的好看點,最好把上膠稍微配高一點。

換電壓主要是看溴酚藍有沒有跑到下膠,沒有確定的時間點。

膠最好現配現用,如果需要保存最好用濕潤的保鮮膜包好。


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