成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

深圳市安培生物科技有限公司
中級會員 | 第5年

19126518388

血清系列
細胞轉染
支原體清除
細胞凍存
實驗耗材
分子試劑
細胞增殖與凋亡
Biozellen系列
培養基
ELISA試劑盒
TOYOBO(東洋紡)
ZYMO RESEARCH
Greiner(格瑞納)
IKA(艾卡)
化學發光底物(ECL)
PROSPEC系列
Epigentek系列
微生物檢測
細胞生物學
Corning康寧
解離試劑
細胞類-實驗耗材
原代細胞
植物檢測系列試劑盒
SERANA
BSA
細胞系
生化試劑盒
環境檢測系列試劑盒(AKEN)
類器官培養
緩沖器和解決方案
生物三凝膠基質
細胞因子分子
生物樣本庫
蛋白研究系列
修飾檢測試劑盒

【RNAi與siRNA技術】基因敲除鼠的實驗建議

時間:2021/8/27閱讀:2686
分享:

如果是在做動物實驗,而且是基因敲除鼠的實驗,那么就會做大批量的小鼠基因型鑒定試驗,來確定自己小鼠的基因型,然而,再做實驗的過程中往往會出現一些意想不到的結果,在這里為大家提一點點小建議。


提取 DNA 

1、組織提取 DNA 剪下老鼠 0.5-1.2cm 尾巴或者耳朵或者稱取 20mg 組織樣本,將樣本剪碎放在 1.5ml 的 EP 管中。

2、在每個 EP 管中加入 275 微升的裂解液(我們實驗室使用的是 promega 的試劑盒)將加入裂解液的組織放在 55 攝氏度的水浴箱中過夜(16—18h)裂解*的標志是組織*溶解。

3、第二天振蕩每一個 EP 管,混勻后再離心,轉速 13000rmp 時間是 3 分鐘,取上清分離毛發,將取的上清加到柱型管中(有濾網的小柱型管,柱型管套裝在 1.5 的 EP 管中)。 

4、在每個柱型管中加入 250 微升的 Wizard SV lysis Buffer,此裂解液需要提前水浴 30min, 55 攝氏度。 

5、離心 3min 轉速 13000rpm ,倒掉濾液。 

6、在每個管中加入 650 微升 wash solution 離心 1min 轉速 13000rpm,這一步驟重復四遍,每一次都棄去管底的廢液。 7、4 次洗完之后,什么都不加再離心一次,1min 轉速 13000rmp。 

8、離心之后取出,放入到新的 EP 管中,每一個 EP 管中加入 50 微升 Nuclease-free-water(無核酸酶水)需要提前水浴 30min 中 55 攝氏度。加的過程中要充分覆蓋管底,靜置 2min,離心 2min,保留 EP 管中的液體,此步驟重復兩次。(如果要擱置需要保存在-20 冰箱中)。


自此 DNA 已經提取完成。


顯影 

1、將獲得的液體加入 PCR 混合液中,凝膠電泳,鑒定基因型。 PCR 混合液的配制方法 ddH2O 9.5 微升,Taq12.5 微升,上游引物 0.5 微升,下游引物 0.5 微升。每一個 EP 管中的總量是 24 微升,提取的 DNA 只加 1 微升。 

2、PCR 擴增:將樣品放入 PCR 儀擴增。 

3、制膠——1%的膠。 

小膠:瓊脂糖 0.25g+25mlTEB1% 

中膠:瓊脂糖 0.5g+50mlTEB1% 

大膠:瓊脂糖 1g+100mlTEB1%

4、將瓊脂糖加入 TEB 溶液后微波爐加熱 3min,冷卻后加入核酸染料 EBC,倒入制膠器制膠,30min 后取出膠放入電泳槽中,黑線朝向正極。 

5、加樣,加 Maker。 

6、電泳。 

7、顯影。


一些經驗

1、提取 DNA 的第一步中建議用小鼠的尾巴,優選小鼠尾巴,減輕動物疼痛且便于操作,在標記過程中每一個 EP 管要標號無論蓋子頂部還是管壁,都要做標記,因為要在水浴箱中進行裂解。 

2、在配裂解液的過程中,一般要多配出 2 份的量,因為在加樣的過程中會有液體遺失,以防萬一試劑缺如多配制 2 份。 

3、在制備 pcr 混合液的時候無論是上游還是下游引物總量都不能過多,否則顯影的時候會出現引物二聚體,出現重影。 

4、加入核酸染料的量是 3 到 5 微升。 

5、加入的 maker 和樣品的量建議是 5 微升。 

6、電泳的電壓建議 100v,時間是 45min。 

7、使用離心機的時候要注意用常溫的離心機,非 4 度,因為無論是裂解液還是無核酸酶水都是經過水浴箱 55 度溫浴過的,所以,用常溫的離心機即可。


會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: 国产精品久久久久久一区二区| 久久久久久九九精品久小说| 亚洲人成在线观看网站无码| 精品欧美日韩在线| 精品高潮呻吟99AV无码视频| 欧美精品久久久久久无码人妻| 麻豆精产国品一二三产品| 精品欧美一区二区在线观看| 国内精品久久久久久久试看| 日韩欧美国产一区二区三区| 成人国产色情免费观看| 欧美日韩亚洲精品瑜伽裤| 澳门一级毛片手机在线看| 中文字幕久久久久人妻五十路| 亚洲欧美综合久久久久久| 韩国欧美日本在线观看| 亚洲欧美日韩精品一区| 亚洲欧美日韩国产制服另类| 色情图片网站| 日日摸夜夜添夜夜添A片一Y| 欧洲熟妇大荫蒂高潮A片视频| 亚洲综合激情五月丁香六月| 中文字幕亚洲欧美国产日韩| 九九精品视频一区二区三区| 97国产精品视频在线观看| 亚洲欧美日韩中文在线| 一本大道嫩草AV无码专区| 丰满熟妇被掹烈进入高清片| 午夜福利合集1000在线| 伦理片天堂eeuss影院2o12| 在线点播亚洲日韩国产欧美| 亚洲精品ww久久久久久| 亚洲欧美日韩中字视频三区| 欧美日韩亚洲在线| 国产精品99久久免费黑人人妻| 国产日韩中文在线| 97精品久久久久中文字幕| 亚洲 欧美 日韩 一区二区| 中文字幕乱妇无码AV在线| 啊!啊!啊!使劲操| 国产精品18久久久久久自浆|