紫外分光光度計的校準步驟包括校準前的準備工作、波長校準、吸光度校準以及性能檢查與驗證。通過這些步驟，可以確保紫外分光光度計的準確性和可靠性，為實驗結果提供有力的保障。以下是紫外分光光度計的校準步驟：
1. 校準前的準備工作
- 儀器檢查與清潔：確保紫外分光光度計安裝在穩定、干燥、低溫且無振動的環境中，周圍無強磁場干擾和腐蝕性氣體。檢查儀器外觀是否有損壞，各部件連接是否正常，如比色皿架、電源線等。使用干凈的擦鏡紙或柔軟的布輕輕擦拭儀器的外殼、樣品室、比色皿等，去除灰塵、油污和其他雜質。
- 試劑準備：根據校準需求，準備一系列濃度已知的標準溶液，用于波長校準和吸光度校準。例如，常用的重鉻酸鉀溶液可用于可見光區的校準，硝酸鈉溶液可用于紫外光區的校準。同時，準備好純溶劑作為空白試劑，如蒸餾水、乙醇等，其純度應符合分析要求。
- 儀器預熱：打開紫外分光光度計的電源開關，讓儀器預熱一段時間，一般預熱 10-20 分鐘，使儀器的光源、檢測器等部件達到穩定的工作狀態。
2. 波長校準
- 選擇標準溶液：選擇合適的具有已知最大吸收波長的標準溶液，將其倒入比色皿中，用擦鏡紙擦干比色皿外壁，避免手上的油污對比色皿透光性產生影響。將裝有標準溶液的比色皿放入樣品室中的比色皿架上，注意放置方向要正確，使光路通過溶液。
- 設置參數：在儀器的操作界面上，選擇光譜掃描模式，設置掃描的波長范圍應包括標準溶液的最大吸收波長，掃描速度適中，采樣間隔一般為 1nm 或更小。然后啟動掃描程序，儀器將自動繪制出標準溶液的吸收光譜曲線。
- 調整與記錄：觀察吸收光譜曲線，找到最大吸收波長對應的波峰位置。如果該波峰位置與標準溶液的已知最大吸收波長不一致，說明儀器的波長存在偏差。此時，需要通過儀器上的波長調節按鈕或相關操作菜單，對波長進行微調，使測量得到的最大吸收波長與標準值相符。反復調整和測量，直到波長誤差在允許范圍內，一般要求波長準確度誤差不超過±0.5nm。
3. 吸光度校準
- 空白校正：取出裝有標準溶液的比色皿，將裝有純溶劑的比色皿放入樣品室中的參比池位置，關上樣品室蓋。在操作界面上選擇吸光度測量模式，點擊 “調零” 或 “空白校正” 按鈕，儀器將以純溶劑為空白，將吸光度值調整為零。這樣可以消除溶劑本身對光的吸收以及比色皿等因素對測量結果的影響。
- 標準溶液測量：將裝有標準溶液的比色皿放入樣品室中的樣品池位置，關上樣品室蓋。在操作界面上輸入標準溶液在當前波長下的理論吸光度值，然后點擊 “校準” 或 “測量” 按鈕，儀器將測量標準溶液的實際吸光度值。如果實際測量值與理論值存在偏差，說明儀器的吸光度存在誤差。此時，需要通過儀器上的吸光度調節按鈕或相關操作菜單，對吸光度進行校準，使測量值與理論值相符。可以多次重復測量和校準，直到吸光度誤差在允許范圍內，一般要求吸光度準確度誤差不超過±0.005A。
4. 性能檢查與驗證
- 重復性檢查：使用同一標準溶液，在相同的條件下，連續多次測量其吸光度值，計算測量結果的相對標準偏差(RSD)。一般來說，RSD 應小于 0.5%，以證明儀器的重復性良好。
- 線性范圍檢查：配制一系列不同濃度的標準溶液，按照從低到高的順序依次測量其吸光度值。然后以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。觀察標準曲線的線性關系是否良好，相關系數應大于 0.999，以證明儀器在測量范圍內的線性關系正常。
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