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小鼠單核巨噬細胞白血病細RAW264.7的培養注意事項和要點

閱讀:1326      發布時間:2022-12-16
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  小鼠單核巨噬細胞白血病細RAW264.一般為圓形或橢圓形,小而透亮。因為其具有較強的吞噬能力,并在吞噬抗原后釋放趨化因子,促使細胞分化出偽足,粘附攀爬能力也因此增強。若細胞吞噬抗原過多、培養環境惡劣就會促使細胞呈現出梭形、長梭形,鏡下觀察就會發現細胞形態變為梭形且面積變大,不再是具有細長偽足的類圓形小細胞。這也是出現消化困難的一個主要原因。
  小鼠單核巨噬細胞白血病細RAW264.7的培養注意事項和要點:
  1.由于RAW264.7細胞易有不同形態,傳代時就會發現形態變為梭形的細胞很難消化下來,輕敲培養皿細胞不會脫落,用力吹打又容易對細胞產生較大損傷,因此要盡量避免細胞發生形態改變。即在接種細胞時保持一個適中的傳代密度,避免其向終末細胞分化,因為一旦細胞發生分化變為長形是無法恢復的,這是培養RAW264.7細胞時最需要注意的問題。
  2.RAW264.7細胞喜歡連片生長,正常狀態下應該是一小片一小片的分布在培養皿中,片片之間不相連接,等到長到更多更密的時才會連成大片,但同時也會疊加成層,容易出現部分細胞飄起無法貼壁的問題。所以,要關注好細胞的匯合程度,控制好細胞的生長速度,不能等到疊加成層時才去傳代。
  3.RAW264.7細胞傳代后貼壁時間較短,半小時左右絕大部分細胞就能夠貼下去,剛貼壁時細胞呈圓形,折光度很好,鏡下觀察如小珍珠狀一個個地散落于培養皿中。生長一段時間后,部分細胞會變成類似四角形,伸出偽足之類的。這個時候就是在提醒你注意傳代了,此時無論匯合度如何都需要進行傳代了,因為形態發生改變的細胞對實驗結果會產生較大影響,最終造成實驗數據不理想。
  4.在細胞生長的初始階段,細胞以貼壁的形式生長并呈現出長方體的形態和有“偽足”延伸。隨著培養時間的增加,細胞呈現圓形并以疊加的形式生長。細胞密度達到一定的程度,會有細胞以懸浮的方式散落到到培養基中,鏡下觀察會同時出現懸浮和貼壁兩種形態。
  5.該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時,吸走部分培養液,留下少許培養液(例如使用T25培養瓶留下2 ml),用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落,充分吹打后接種到新的裝有新鮮培養液的培養瓶內,混勻后進行培養。
  6.該細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時,細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起,有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的,在傳代時應收集起來,離心后細胞沉淀可以繼續培養。
  7.血清質量差異可能引起細胞貼壁能力變化,建議選用高質量的胎牛血清。

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