小鼠主動脈內皮細胞凍存方法和復蘇原則
小鼠主動脈內皮細胞凍存方法:
待細胞生長狀態良好時,可進行小鼠主動脈內皮細胞|細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
小鼠主動脈內皮細胞復蘇的原則:
快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使小鼠主動脈內皮細胞|細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
小鼠主動脈內皮細胞分離自主動脈組織;主動脈是體循環的動脈主干。其運行路徑為:升主動脈起于左心室,至右側第2胸肋關節高度移行為主動脈弓,弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈;在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈,以上為胸主動脈,至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動脈;髂總動脈在骶髂關節高度分為髂內、外動脈。主動脈內皮細胞是覆蓋在主動脈內面的單層細胞,可分泌一系列血管活性物質而保持血管穩態,當其受到炎癥或其它因素刺激后穩態被破壞而導致一些心血管疾病的發生。因此,主動脈內皮細胞已成為研究心血管疾病發病機制及治療藥物不可缺少的工具。內皮細胞或血管內皮是一薄層的專門上皮細胞,由一層扁平細胞所組成。它形成血管的內壁,是血管管腔內血液及其他血管壁(單層鱗狀上皮)的接口。內皮細胞是沿著整個循環系統,由心臟直至最小的微血管。