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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 等密度離心法去除紅細胞和死細胞

時間:2021-11-1 閱讀:504
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PriCells: 等密度離心法去除紅細胞和死細胞                         

                         

器材和試劑: 
所有直接接觸細胞的用品和試劑必須無菌。
1. 標注體積刻度的試管(圓錐形底);
2. 巴斯德吸管(短型和長型);
3. 10ml刻度吸管和洗耳球或移液裝置;
4. 臺式離心機;
5. 淋巴細胞分離液或類似試劑;
6. 培養基;


實驗方法:
1. 重懸細胞使之達到5×106—107個/ml的高濃度。在一個離心管中加入10ml淋巴細胞分離液,用巴斯德吸管或10ml移液管小心將5ml的原代細胞懸液加于淋巴細胞分離液面上。將容器傾斜一個角度,沿容器壁慢慢地將細胞懸液滴下,而不是直接滴到淋巴細胞分離液表面。目的是在兩種液體之間得到一個清晰的界面,以便更好地分離;
2. 不制動1000r/min離心試管20min(注:離心時緩慢地減速可使淋巴細胞分離液與培養基之間形成清晰的界面);
3. 從離心機中小心地取出容器,觀察兩液面之間的界面,可見一乳狀黃色細胞帶。紅細胞和死細胞形成沉淀沉于容器底部;
4. 用一個巴斯德吸管吸出界面可見的細胞層,轉入一個離心管;
5. 向收集的細胞中加入新鮮培養基并混勻。1000r/min離心5min,重復兩次,洗去細胞表面的淋巴細胞分離液;
6. 將細胞重懸于已知體積的培養基中,進行細胞計數和活力測定;


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