人臍靜脈內皮細胞細胞株培養問題：

　　Q1. 人臍靜脈內皮細胞液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

　　要冷藏！！因為液體培養基經冷凍后再經溶化時，其溶液的pH值會發生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。

　　Q2.人臍靜脈內皮細胞 液體培養基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺?；A醫學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中，其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色，-24C保存。

　　人臍靜脈內皮細胞培養過程：

　　HUVEC為原代細胞，除復蘇、凍存過程中與常規細胞系如293T等貼壁細胞雷同外，需主要注意的是培養液放置溫度、Trypsin消化細胞過程。

　　1）培養液放置溫度：細胞代理銷售公司技術推薦在使用前30min室溫（25-27℃）中放置配制好的培養液，用臉貼培養瓶而感覺到不冷（即接近人體溫）即可使用。Trypsin/EDTA solution、TrypsinNeutralizer solution可同樣處置。

　　2）Trypsin消化細胞過程：加入4mL Trypsin/EDTA solution/ 25cm2 flask后晃

　　動3次，吸棄3mL Trypsin/EDTA，室溫中作用1-3mins，顯微鏡下觀察細胞變圓、脫離培養皿即可加入3mL Trypsin Neutralizer solution進行終止作用。

　　3）轉移細胞至15mL離心管中，1000rpm 離心5mins，棄上清，加入新鮮的培養液轉移至新的培養皿/瓶。

　　4）復蘇、凍存雷同其他細胞操作，細胞復蘇、傳代后不可多次傳代，一次復蘇的細胞盡量滿足連續性試驗需要。